Adeno-asszociált vírus

adeno-asszociált vírus

Adeno-asszociált vírusok
tudományos osztályozás
Csoport:Vírusok [1]Birodalom:MonodnaviriaKirályság:ShotokuviraeTípusú:cossaviricotaOsztály:QuintoviricetesRendelés:PiccoviralesCsalád:ParvovírusokAlcsalád:ParvovirinaeNemzetség:DependoparvovírusKilátás:adeno-asszociált vírus
Nemzetközi tudományos név
Adeno-asszociált dependoparvovírus A
Szinonimák
  • Adeno-asszociált vírus 1 [2]
  • Adeno-asszociált vírus-1 [2] [3]
  • Adeno-asszociált vírus-2 [3]
  • Adeno-asszociált vírus-3 [3]
  • Adeno-asszociált vírus-4 [3]
A Baltimore Csoport
II: ssDNS vírusok

Adeno-asszociált vírus ( eng.  Adeno-asszociált dependoparvovirus A , AAV) egy kis vírus , amely megfertőzi az emberek és néhány más főemlős sejtjeit . Úgy tűnik, hogy az adeno-asszociált vírus nem okoz betegséget emberben, ezért gyenge immunválaszt vált ki.

Az adeno-asszociált vírus megfertőzheti az osztódó és nem osztódó sejteket, és integrálhatja genomját a gazda genomjába. Ezek a tulajdonságok az AAV-t különösen vonzó jelöltté teszik a génterápiás vírusvektorok tervezésében [ 4 ] .

Az adeno-asszociált vírus a parvovírusok családjába ( Parvoviridae ) tartozó Dependoparvovirus nemzetségbe tartozik . A vírus kicsi (20 nm), nem rendelkezik lipidburokkal, és nem kódolja saját replikációs enzimeit .

Történelem

1965-ben Robert Atchison publikált egy új vírust, az adeno-asszociált vírust [5] . Vírusrészecskéket elektronmikroszkóppal detektáltak majom adenovírus készítményekben , amelyeket többször ültettek át primer rhesus majomvese sejtkultúrákra . Az Atchison-csoport ultraszűréssel választotta el az új vírus 24 nm-es részecskéit a nagyobb, 80 nm-es adenovírus részecskéktől [6] .

Az izolálást követően kimutatták, hogy a részlegesen tisztított adeno-asszociált vírusvirionok nem képesek önmagukban szaporodni , de képesek replikálódni és terjedni adenovírussal fertőzött tenyészetekben . Így az adeno-asszociált vírusról kiderült, hogy egy hibás kísérővírus, amelynek kiegészítő vírusra van szüksége a teljes replikációhoz. Mivel az adeno-asszociált vírus nem kódolja saját DNS-polimerázát , replikációjához egy helper vírusra, általában egy adenovírusra van szükség [7] .

2013 júliusában a család revíziója eredményeként 4 közeli rokon fajt egyesítettek egybe, a nemzetség nevét Dependoparvovirus -ra , a faj nevét Adeno-asszociált dependoparvovírus A-ra változtatták [3] .

Vektor a génterápiához

Előnyök és hátrányok

A vad típusú adeno-asszociált vírusnak van néhány előnye a génterápia szempontjából . Az egyik fő előnye, hogy ez a vírus nem patogén . Az adeno-asszociált vírus megfertőzheti a nem osztódó sejteket, és a tizenkilencedik kromoszómán lévő specifikus helyeken (AAVS1) beépülhet a gazda genomjába [8] .

Ez a tulajdonság az adeno-asszociált vírust kiszámíthatóbbá teszi, mint a retrovírusokat . A retrovírusok potenciálisan veszélyesek mutagénként , mivel véletlenszerűen beépülnek a gazdaszervezet genomjába, ami rákos daganatok kialakulásához vezethet. Az adeno-asszociált vírusgenom általában egy meghatározott helyre inszertálódik, és véletlenszerű inszerciók elhanyagolható gyakorisággal fordulnak elő. Amikor adeno-asszociált víruson alapuló génterápiás vektorokat hoznak létre, a rep és cap géneket eltávolítják a vírus DNS-éből . A kívánt gén a promoterrel együtt invertált terminális ismétlődések ( inverted terminális ismétlődések, ITR) közé inszertálódik , aminek eredményeként a sejtmagban konkatamerek képződnek, miután a sejtes DNS polimeráz a második DNS- szálat szintetizálja .  Az adeno-asszociált vírusokon alapuló génterápiás vektorok episzómális konkatamereket képeznek a gazdasejt magjában. A nem osztódó sejtekben ezek a konkatamerek érintetlenek maradnak; osztódó sejtekben az adeno-asszociált vírus DNS elveszik a sejtosztódás során, mivel az episzómális DNS nem replikálódik a gazdasejt DNS-replikációja során. Az adeno-asszociált vírus DNS-ének véletlen beépülése a gazda genomjába nagyon ritka. Az adeno-asszociált vírus immunogenitása is nagyon alacsony , amit nyilvánvalóan korlátoz a semlegesítő antitestek termelésének alacsony hatékonysága , míg az utóbbiról nem bizonyították egyértelműen, hogy citotoxikus [9] [10] [11] . A leírt jellemzők, valamint a nem osztódó sejtek fertőzésének képessége meghatározzák az adeno-asszociált vírus előnyeit az adenovírusokkal szemben a génterápiában.

Az adeno-asszociált vírus alkalmazásának vannak hátrányai is. A terápiás gének klónozására rendelkezésre álló vírusgenom kapacitása mindössze körülbelül 4800 bázispár . Így ez a vektor nem alkalmas nagy gének klónozására. A két genom fordított terminális ismétlődései hibridizálhatnak , és fej-farok konkatamereket képezhetnek, közel megkétszerezve a vektor kapacitását.

A vad típusú vírussal való fertőzés gyakran a humorális immunitás aktiválódását okozza . A semlegesítő antitestek aktivitása bizonyos esetekben csökkenti az AAV2 szerotípus alkalmazhatóságát. Az AAV2 az agyba is bejuthat , és erősen neuronspecifikus .

Klinikai vizsgálatok

Jelenleg a cisztás fibrózis és hemofília kezelésére szolgáló adeno-asszociált vírusalapú gyógyszerek (vektorok) a klinikai vizsgálatok első szakaszán mennek keresztül. Ígéretes eredmények születtek a Parkinson-kór elleni gyógyszerekkel kapcsolatos klinikai vizsgálatok első fázisában . Más klinikai vizsgálatok kimutatták az adeno-asszociált vírusvektorok biztonságosságát Canavan-kórban , izomdisztrófiában és Bilshovsky-Jansky

Az adeno-asszociált vírusvektoron alapuló vektorok klinikai vizsgálatai [12]
Betegség Gén Az adagolás módja Teszt fázis A tesztalanyok száma Állapot
cisztás fibrózis CFTR Tüdő, aeroszol én 12 Befejezve
CFTR Tüdő, aeroszol II 38 Befejezve
CFTR Tüdő, aeroszol II 100 Befejezve
Hemofília B FIX Intramuszkuláris én 9 Befejezve
FIX máj artéria én 6 Befejezett
Ízületi gyulladás TNFR:Fc Intraartikuláris én egy Folytatni
örökletes emphysema AAT Intramuszkuláris én 12 Folytatni
izomsorvadás szarkoglikán Intramuszkuláris én tíz Folytatni
Parkinson kór GAD65, GAD67 a koponya belsejében én 12 Befejezve [13]
Canavan betegség AAC a koponya belsejében én 21 Folytatni
Batten betegség CLN2 a koponya belsejében én tíz Folytatni
Alzheimer-szindróma NGF a koponya belsejében én 6 Folytatni
spinális izomsorvadás SMN1 intratekális I–III tizenöt Számos próba befejeződött, több folyamatban van ( Zolgensma )

A prosztatarák kezelésére irányuló klinikai vizsgálatok 2005-ben a III. stádiumban vannak [12] , azonban ezek az ex vivo vizsgálatok nem tartalmazzák az ADV betegeknek történő közvetlen beadását.

Patológia

Az adeno-asszociált vírus nem okoz betegséget emberben. Ez a vírus azonban a férfi meddőség kockázati tényezőjének bizonyult [14] . Az adeno-asszociált vírusok genomiális DNS-e olyan spermamintákban található, amelyekben károsodott a spermiumok szerkezete és funkciója . Azonban nem találtak közvetlen kapcsolatot e fertőzés és a férfi meddőség között.

Szerep a hepatocelluláris karcinóma kialakulásában

A hepatocelluláris karcinóma ritka formáiban szenvedő betegeken végzett közelmúltbeli tanulmányok arra utalnak, hogy az AAV2 vírus szerepet játszhat a rák kiváltó okaiban. Mivel az AAV2 vírus olyan géneket céloz meg, amelyek fontos szerepet játszanak a sejtszaporodásban, a kutatók úgy vélik, hogy a fertőzés túlaktiválódáshoz vezet, ami tumornövekedést eredményez. Ez a felfedezés megkérdőjelezi az AAV2 vírusok génterápiás alkalmazásának biztonságosságát [15] .

Szerkezet

Genom, transzkriptom és proteom

Az adeno-asszociált vírus genomja körülbelül 4,7 ezer nukleotid hosszúságú (+ vagy -) egyszálú DNS -t (ssDNS) tartalmaz. A genomiális DNS-molekula végein fordított terminális ismétlődések ( ITR -ek ) találhatók .  A genom két nyitott leolvasási keretet ( ORF ) tartalmaz : rep és cap . Az első négy átfedő gént tartalmaz, amelyek Rep fehérjéket kódolnak, amelyek szükségesek a vírus életciklusához , a második leolvasási keret a kapszid fehérjék átfedő nukleotid szekvenciáit tartalmazza : VP1, VP2 és VP3, amelyek a kapszid ikozaéder fejét alkotják [16] .  

Invertált terminál ismétlődik

A fordított terminális ismétlődések szekvenciája ( eng.  Inverted Terminal Repeat, ITR ) 145 nukleotidból áll. Az ITR-ek szimmetrikusan helyezkednek el az adeno-asszociált vírusok genomjában, és szükségesek a genomi DNS - replikációhoz [17] . Az ITR másik tulajdonsága a hajtűk kialakításának képessége, amely lehetővé teszi a DNS második szálának szintézisét primáz részvétele nélkül . Fordított terminális ismétlődésekre van szükség a vírus DNS-ének a tizenkilencedik emberi kromoszóma egy specifikus régiójába történő integrálásához és a provírus DNS kromoszómából való felszabadulásához [18] [19] , valamint adeno-asszociált komplexek képződéséhez. vírus DNS dezoxiribonukleáz-rezisztens burokfehérjékkel [20] .

Génterápia esetén az ITR-nek a terápiás gén után cisz pozícióban kell lennie. Ezt a mintát alkalmazzák adeno-asszociált víruson ( eng.  rekombináns AAV, rAAV ) alapuló rekombináns vektorok előállítására, amelyek riporter- vagy terápiás géneket tartalmaznak. Kimutatták, hogy a replikációhoz és a kapszid hajtogatáshoz nincs szükség ITR-ekre a cisz pozícióban. A rep gén nukleotidszekvenciájában egy cisz -hatású Rep-függő elemet (CARE ) találtak . A cisz helyzetben a CARE fokozza a vírusrészecskék replikációját és összeállítását [21] [22] [23] [24] .  

Gének és fehérjék rep

A „ genom bal oldala ” két promotert tartalmaz  , a p5-et és a p19-et, amelyekből két különböző hosszúságú , egymást átfedő mRNS íródik át . Minden, a megfelelő mRNS-t kódoló gén tartalmaz egy intront , amely a splicing folyamat során kivágható . Ennek eredményeként négy különböző mRNS szintetizálható, és ennek megfelelően négy különböző Rep fehérje átfedő szekvenciákkal. A fehérjéket kDa -ban kifejezett molekulatömegük alapján nevezik el : Rep78, Rep68, Rep52 és Rep40 [25] . A Rep78 és 68 specifikusan primerként köt egy hajtűt, amelyet fordított terminális ismétlődések alkotnak, majd levágják a terminális felbontás helyén . Kimutatták, hogy a Rep78 és 68 szükséges az adeno-asszociált vírus DNS specifikus integrációjához a gazda genomjába. Négy Rep fehérje köti az ATP-t és helikáz aktivitással rendelkezik. Ezek a fehérjék fokozzák a p40-promóterből történő transzkripciót, de gyengítik a p5- és p19-promoterek transzkripcióját [19] [25] [26] [27] [28] [29] .  

cap gének és VP fehérjék

Az adeno-asszociált vírus genomiális DNS -ének (+) szálának „jobb oldala” átfedő szekvenciákat tartalmaz, amelyek három kapszidfehérjét  kódolnak, a VP1-et, VP2-t és VP3-at. Ezeknek a géneknek a transzkripciója egyetlen promoterből , a p40- ből indul ki . A megfelelő fehérjék molekulatömege 87 , 72 és 62 kDa [30] . Mindhárom fehérje ugyanabból az mRNS-ből transzlálódik. A transzkripciót követően a pre-mRNS két különböző módon spliced, miáltal egy hosszabb vagy rövidebb intron kivágásra kerül, és 2300 vagy 2600 nukleotidból álló mRNS jön létre . Általában, különösen adenovírus jelenlétében , egy hosszabb intront vágnak ki. Ebben a formában az első startkodon AUG kivágásra kerül , amelyből a VP1 fehérje szintézise megindul, és a VP1 fehérje szintézis szintje csökken. Az első kodon , amely hosszabb transzkriptumAUG esetén megmarad, a VP3 fehérje startkodonja. Azonban az ugyanabban a leolvasási keretben ezt a kodont megelőző nukleotidszekvencia tartalmazza a treonint kódoló szekvenciát , amelyet az optimális Kozak-szekvencia vesz körül . Ez a VP2 fehérje szintézisének csökkenéséhez vezet (amely egy VP3 fehérje, amely további aminosavakat tartalmaz az N-terminálison [31] [32] [33] [34] . ACG

Mivel a nagyobb intron előnyösen kivágásra kerül a pre-mRNS-ből, és mivel a kodon ACGegy gyengébb startkodon, a megfelelő fehérjék in vivo körülbelül 1:1:20 arányban expresszálódnak, és a fehérjék is benne vannak a vírusrészecskében. ugyanilyen arányban [35] . A VP1 fehérje N-terminálisán található egyedi fragmentum foszfolipáz A2 ( PLA2 ) aktivitással rendelkezik ,  amely valószínűleg szükséges a vírusrészecskék késői endoszómákból való felszabadulásához [36] . Muralidar és munkatársai kimutatták, hogy a VP2 és VP3 fehérjék nélkülözhetetlenek egy vírusrészecske összeállításához [33] . Warrington és munkatársai kimutatták, hogy a VP2 fehérje nem feltétlenül szükséges egy vírusrészecske összeállításához, és nem befolyásolja a vírus patogén tulajdonságait. A VP2 fehérje működését azonban nem befolyásolják az N-terminális részbe történő jelentős inszerciók, míg a VP1-be történő inszerciók csökkentik a foszfolipáz aktivitását [37] .

A VP3 fehérje kristályszerkezetét 2002-ben Xi és Bew és munkatársai határozták meg [38] .

Szerotípusok és receptorok

2006 -ig 11 adeno-asszociált vírus szerotípust írtak le [39] . Az összes ismert szerotípus számos szövettípusban képes megfertőzni a sejteket . A szövetspecifitást a kapszidfehérjék szerotípusa határozza meg , ezért az adeno-asszociált vírusvektorokat úgy tervezték, hogy meghatározzák a kívánt szerotípust.

2. szerotípus

Az adeno-asszociált vírus 2-es szerotípusát tanulmányozták a legszélesebb körben [40] [41] [42] [43] [44] [45] . Az adeno-asszociált vírus 2-es szerotípusa természetes affinitást mutat a vázizmokhoz [46] , a neuronokhoz [40] , a vaszkuláris simaizomhoz [47] és a hepatocitákhoz [48] .

Három sejtes receptort írtak le az adeno-asszociált vírus 2-es szerotípusára: heparán -szulfát proteoglikán (HSPG ) , integrin  a V β 5 és fibroblaszt növekedési faktor receptor 1 ( FGFR-1 ) . Az előbbi az elsődleges receptor, az utóbbi kettő a társreceptor, és lehetővé teszi az adeno-asszociált vírus bejutását a sejtbe receptor által közvetített endocitózissal [49] [50] [51] [52] . A HSPG jelentős mértékben jelen van az extracelluláris anyagban, és elsődleges receptorként működik, miközben megtisztítja a szervezetet az adeno-asszociált vírusrészecskéktől és csökkenti a fertőzés hatékonyságát [53] .  

Tanulmányok kimutatták, hogy az adeno-asszociált vírus 2-es szerotípusa elpusztítja a rákos sejteket anélkül, hogy károsítaná az egészséges sejteket. "Tanulmányaink kimutatták, hogy a 2-es típusú adeno-asszociált vírus, amely nagy sejtpopulációt fertőz meg, sokféle rákos sejtet elpusztít, de az egészséges sejteket nem" - mondja Craig Meyer , a Penn State College of Medicine immunológia és mikrobiológia professzora. Pennsylvania [54] . Ezek a vizsgálatok új rákellenes gyógyszerek létrehozásához vezethetnek.

Egyéb szerotípusok

Bár az adeno-asszociált vírus 2-es szerotípusa a legnépszerűbb szerotípus a tudományos kutatásban, más szerotípusokról kimutatták, hogy hatékonyabb génszállító vektorok . Például az adeno-asszociált vírus 6-os szerotípusa jobban megfertőzi a légúti hámsejteket, a 7-es szerotípusú vírus nagyon magas szintű transzdukciót mutat az egér vázizomsejtjeivel, a 8-as szerotípusú vírus pedig jól transzdukálja a májsejteket [55] [56] [57] , az 1-es és 5-ös szerotípusú vírusok pedig nagyon hatékonyak, géneket szállítanak az ér endothel sejtjébe [58] . Az adeno-asszociált vírus 6-os szerotípusa, amely az 1-es és 2-es szerotípus hibridje [57] , szintén alacsonyabb immunogenitású, mint a 2-es szerotípusú vírus [56] .

A szerotípusok különböznek abban a receptorban, amelyhez kötődnek. Például a 4-es és 5-ös szerotípusú vírusok transzdukciója gátolható sziálsavoldattal [59] , míg az 5-ös szerotípusú vírus a vérlemezke növekedési faktor receptorán keresztül jut be a sejtekbe [60] .

Immunválasz

Az adeno-asszociált vírus különösen érdekes a génterápia számára, mivel korlátozott mértékben képes immunválaszt kiváltani emberben. A vírus ezen tulajdonsága különösen alkalmassá teszi transzdukcióra , mivel csökkenti az immunpatológiák kockázatát.

Veleszületett immunitás

Az állatok veleszületett immunválaszt mutatnak az adeno-asszociált vírusra. A vírus egereknek történő intravénás beadása gyulladásos citokinek termelését, neutrofilek és más leukociták májba való beszivárgását okozza , ami a jelek szerint jelentősen csökkenti az injektált vírusrészecskék számát [61] .

Humorális immunitás

Kimutatták, hogy a vírus humorális választ okozhat állatokban és emberekben is. Az emberi populáció akár 80%-a 2-es szerotípusú szeropozitív Bebizonyosodott, hogy a neutralizáló antitestek többféle beadási móddal csökkenthetik az adeno-asszociált vírusvektorok transzdukcióját [62] .

Sejtes immunitás

A vírusra és a vírusból származó vektorokra adott sejtes immunválaszt 2005 -ig nem ismerték jól [62] . A hemofília B kezelésére szolgáló, adeno-asszociált vírus 2-es szerotípusán alapuló vektor klinikai vizsgálatai kimutatták, hogy a transzdukált sejtek elpusztulhatnak [63] . Tanulmányok kimutatták, hogy a CD8+ T-limfociták képesek felismerni az adeno-asszociált víruskapszid elemeit in vitro [64] , ami a T - limfocitákhoz képest a vektorokra adott citotoxikus válasz lehetőségét jelzi . Ezek a vizsgálatok azonban nem teljesek, és az ilyen citotoxikus válasz lehetőségét nem tárták fel teljesen.

Életciklus

Az adeno-asszociált vírus életciklusában a sejtfertőzés szakaszától az új vírusrészecskék kialakulásáig több szakasz különböztethető meg:

  1. kötődés a plazmamembránhoz
  2. endocitózis
  3. mozgás az endoszómán belül
  4. kilépés a késői endoszómából vagy lizoszómából
  5. mozog a sejtmagba
  6. replikatív vírus kettős szálú DNS termelése
  7. rep gén expressziója
  8. genomiális DNS- replikáció
  9. cap gének expressziója, leány egyszálú DNS szintézise
  10. virion szerelvény
  11. vírusrészecskék felszabadulása a fertőzött sejtből

Néhány lépés a cella típusától függően eltérő lehet. A vírus DNS-replikációjának paraméterei az azonos típusú sejtek között is eltérhetnek a sejtciklus szakaszától függően [65] .

Az adeno-asszociált vírus nem képes replikálódni olyan sejtekben, amelyek nem fertőzöttek adenovírusokkal . A vírusrészecskék képződésének ez a tulajdonsága azt jelzi, hogy az adeno-asszociált vírus adenovírusokból származik. Kimutatták, hogy az adeno-asszociált vírus DNS-replikációja elősegíthető bizonyos adenovírusokból származó fehérjék [66] [67] vagy más vírusok, például herpes simplex [68] vagy genotoxikus ágensek, például ultraibolya sugárzás vagy hidroxi- karbamid [69] [70 ] jelenlétében. ] [71] .

Az adeno-asszociált vírusok szaporodásához szükséges minimális adenovírus-génkészletet Matsushita és Ellinger és munkatársai írták le [66] . Ez a felfedezés lehetővé tette olyan rekombináns adeno-asszociált vírusok létrehozását, amelyek nem igénylik az adenovírussal való együttes fertőzést. Helper vírusok vagy genotoxikus faktorok hiányában az adeno-asszociált vírus DNS episzómális formában inszertálható a gazda genomjába. Az első esetben a Rep78 és Rep68 fehérjék hajtják végre az integrációt a gazda genomjába, és a beillesztett szekvenciát szegélyező fordított terminális ismétlődések ( ITR ) jelenléte szükséges .  Egerekben az adeno-asszociált vírusgenom episzómaként (körkörös DNS, fejtől farokig orientáció) elhelyezkedhet nem osztódó szövetekben – például a vázizomzatban [72] .

Lásd még

Jegyzetek

  1. ↑ Vírusok taxonómiája a Vírusok  Taxonómiájának Nemzetközi Bizottsága (ICTV) honlapján .
  2. ↑ 1 2 ICTV rendszertani előzmények: Adeno-asszociált dependoparvovírus A az ICTV honlapján  ( Hozzáférés:  2017. május 7.) .
  3. ↑ 1 2 3 4 5 A Parvoviridae család taxonómiájának racionalizálása és kiterjesztése  : [ eng. ] // ICTVonline. — Hozzárendelt kód: 2013.001a-aaaV. - 2013. - 8. o.
  4. ↑ Grieger JC, Samulski RJ Adeno-asszociált vírus mint génterápiás vektor: vektorfejlesztés, gyártás és klinikai alkalmazások  (angol)  // Advances in biochemical engineering/biotechnology. - Berlin , Németország , 2005. - Iss. 99 . - P. 119-145. — PMID 16568890 .
  5. ↑ Atchison RW, Castro BC, Hammon WM. Adenovírus-asszociált hibás vírusrészecskék  (angol)  // Tudomány. - 1965. - 1. évf. 149 . - P. 754-756 .
  6. ↑ Smith RH Adeno-asszociált vírus integráció: vírus versus vektor // Génterápia. - 2008. - T. 15 , 11. sz . - S. 817-822 . - doi : 10.1038/gt.2008.55 .
  7. ↑ Ni TH, McDonald WF, Zolotukhin I, Melendy T, Waga S, Stillman B, Muzyczka N. Az adeno-asszociált vírus DNS-replikációjához szükséges celluláris fehérjék adenovírus-koinfekció hiányában // J Virol. - 1998. - T. 72 . - S. 2777-2787 .
  8. ↑ Surosky, RT; Urabe, M & Godwin, S.G. et al. (1997), Adeno-asszociált vírus Rep fehérjék a DNS-szekvenciákat a humán genom egy egyedi lokuszára célozzák, Journal of virology v . 71 (10), PMID 9311886 
  9. ↑ Chirmule, N; Propert, K ​​​​& Magosin, S et al. (1999), Immune responses to adenovirus and adeno-asssociated virus in humans, Genetherapy (szeptember szám): 1574-83, PMID 10490767 
  10. ↑ Hernandez, YJ; Wang, J & Kearns, W.G. et al. (1999), A látens adeno-asszociált vírusfertőzés humorális, de nem sejt-mediált immunválaszt vált ki nem humán főemlős modellben, Journal of virology (no. október): 8549-58, PMID 10482608 
  11. ↑ Ponnazhagan, S; Mukherjee, P & Yoder, MC et al. (1997), Adeno-asssociated virus 2-mediált géntranszfer in vivo : szerv-tropizmus és transzdukált szekvenciák expressziója egerekben, Gene (No. Apr 29): 203-10, PMID 9185868 
  12. ↑ 1 2 Carter, BJ (2005), Adeno-Associated Virus Vectors in Clinical Trials, Human Gene Therapy vol. 16: 541-50, PMID 15916479 
  13. ↑ Kaplitt, M.G.; Feigin, A; MJ és mások (2007): A Parkinson-kór adeno-asszociált vírus (AAV) által hordozott GAD-génnel való génterápia biztonsága és tolerálhatósága: nyílt, I. fázisú vizsgálat, Lancet T. 369: 2097-2105, PMID 17586305 
  14. ↑ Erles K., Rohde V., Thaele M., Roth S., Edler L., Schlehofer JR adeno-asszociált vírus (AAV) DNS-e hereszövetben és abnormális spermamintában   // Hum . reprodukció. : folyóirat. - 2001. - november ( 16. évf. , 11. sz.). - P. 2333-2337 . — PMID 11679515 .
  15. ↑ Nault JC et al. Ismétlődő AAV2-vel kapcsolatos inszerciós mutagenezis humán hepatocelluláris karcinómákban // Nature genetics. — 2015.
  16. ↑ Carter, BJ (2000), Adeno-asszociált vírus és adeno-asszociált vírusvektorok génszállításhoz, DD Lassic & N, Smyth Templeton, Gene Therapy: Therapeutic Mechanisms and Strategies , New York City : Marcel Dekker, Inc., p. 41-59, ISBN 0-585-39515-2 
  17. ↑ Bohenzky, R.A.; LeFebvre, RB és Berns, KI (1988), Szekvencia és szimmetria követelmények az adeno-asszociált vírus terminális ismétlődésének belső palindrom szekvenciáin belül, Virology ( San Diego : Academic Press). - T. 166 (2), PMID 2845646 
  18. ↑ Wang, XS; Ponnazhagan és Srivastava (1995), Rescue and replikációs jelek az adeno-asszociált vírus 2 genomjából, Journal of Molecular Biology 250: 573-80, PMID 7623375 
  19. ↑ 1 2 Weitzman, MD; Kyostio, S.R.; Kotin, RM és Owens, RA (1994), Adeno-asszociált vírus (AAV) Rep fehérjék közvetítik az AAV DNS és a humán DNS-ben lévő integrációs helye közötti komplexképződést, Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America, 91. köt. (13): 5808-12, PMID 8016070 
  20. ↑ Zhou, X & Muzyczka, N (1998), In vitro package of adeno-asssociated virus DNA, Journal of virology 72 (4): 3241-7, PMID 9525651 
  21. ↑ Nony, P; Tessier, J; Chadeuf, G & Ward, P és mtsai. (2001), Az új cisz-hatású replikációs elem az adeno-asszociált vírus 2-es típusú genomjában részt vesz az integrált rep-cap szekvenciák amplifikációjában, Journal of virology 75 (20): 9991-4, PMID 11559833 
  22. ↑ Nony, P; Chadeuf, G; Tessier, J & Moullier, P és mtsai. (2003), Bizonyíték rep-cap szekvenciák adeno-asszociált vírus (AAV) 2-es típusú kapszidokba történő csomagolására fordított terminális ismétlődések hiányában: modell rep-pozitív AAV-részecskék előállítására, Journal of virology v . 77, PMID 12477885 
  23. ↑ Philpott, NJ; Giraud-Wali, C; Dupuis, C & Gomos, J et al. (2002), A rekombináns adeno-asszociált vírus-DNS vektorok hatékony integrációjához p5-rep szekvencia szükséges a cisz-ben, Journal of virology v . 76 (11), PMID 11991970 
  24. ↑ Tullis, GE és Shenk, T (2000), Az adeno-asszociált vírus 2-es típusú vektorok hatékony replikációja: cisz-ható elem a terminális ismétlődéseken kívül és minimális méret, Journal of virology T. 74 (24), PMID 11090148 
  25. ↑ 1 2 Kyostio, S.R.; Owens, R. A.; Weitzman, M. D. és Antoni, B. A. és munkatársai. (1994), Ano-asszociált vírus (AAV) vad típusú és mutáns Rep fehérjék elemzése az AAV p5 és p19 mRNS szintjét negatívan szabályozó képességük tekintetében, Journal of virology 68 (5): 2947-57, PMID 8151765 
  26. ↑ Im, DS & Muzyczka, N (1990), A Rep68 AAV-eredetű kötőfehérje egy ATP-függő helyspecifikus endonukleáz DNS-helikáz aktivitással. Cell T. 61 (3): 447-57, PMID 2159383 
  27. ↑ Im, DS és Muzyczka, N (1992), Az adeno-asszociált vírus Rep78, Rep52 és Rep40 részleges tisztítása és biokémiai jellemzésük, Journal of virology 66 (2): 1119-28, PMID 1309894 
  28. ↑ Samulski, RJ (2003), AAV vektorok, a humán génterápia jövőbeli igáslova, Ernst Schering Research Foundation workshop (43. szám): 25-40, PMID 12894449 
  29. ↑ Trempe, JP és Carter, BJ (1988a), Az adeno-asszociált vírus génexpressziójának szabályozása 293 sejtekben: az mRNS mennyiségének és transzlációjának szabályozása, Journal of virology (1. szám): 68-74, PMID 2824856 
  30. ↑ Jay, FT; Laughlin, CA & Carter, BJ (1981), Eukarióta transzlációs kontroll: Az adeno-asszociált vírusfehérje szintézist befolyásolja az adenovírus DNS-kötő fehérje mutációja, Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States, T. 78 (5): 2927-31, PMID 6265925 
  31. ↑ Becerra, S. P.; Rose, JA; Hardy, M és mások (1985), Az adeno-asszociált vírus kapszidfehérjék B és C közvetlen térképezése: egy lehetséges ACG iniciációs kodon, Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America, 82 (23): 7919- 23, PMID 2999784 
  32. ↑ Cassinotti, P; Weitz, M & Tratschin, JD (1988), Az adeno-asszociált vírus (AAV) kapszidgénjének szervezése: a vírus kapszidfehérjét 1 kódoló kisebb spliced ​​mRNS feltérképezése, Virology T. 167 (1): 176-84 , PMID 2847413 
  33. ↑ 1 2 Muralidhar, S; Becerra, SP & Rose, JA (1994), Adeno-asszociált vírus 2-es típusú szerkezeti fehérje iniciációs kodonjainak helyspecifikus mutagenezise: hatások a szintézis szabályozására és a biológiai aktivitásra, Journal of virology 68 (1): 170-6, PMID 8254726 
  34. ↑ Trempe, JP és Carter, BJ (1988b), Alternatív mRNS splicing szükséges az adeno-asszociált vírus VP1 kapszid fehérje szintéziséhez, Journal of virology v . 62 (9): 3356-63, PMID 2841488 
  35. ↑ Rabinowitz, JE & Samulski, RJ (2000), Egy jobb vektor építése: az AAV virionok manipulálása, Virology T. 278 (2): 301-8, PMID 11118354 
  36. ↑ Girod, A; Wobus, CE; Zádori, Z és mások (2002), A 2-es típusú adeno-asszociált vírus VP1 kapszid proteinje a vírusfertőzéshez szükséges foszfolipáz A2 domént hordoz, The Journal of general virology T. 83 (5): 973-8, PMID 11961250 
  37. ↑ Warrington, KH, Jr; Gorbatyuk, OS; Harrison, JK és mások (2004), Adeno-asszociált vírus 2-es típusú VP2 kapszid fehérje nem esszenciális, és elviseli a nagy peptid inszerciókat az N-végén, Journal of virology 78 (12): 6595-609, PMID 15163751 
  38. ↑ Xie, Q; Bu, W; Bhatia, S és mások (2002), Az adeno-asszociált vírus (AAV-2) atomszerkezete, a humán génterápia vektora, Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America 99(16): 10405-10, PMID 12136130 
  39. ↑ Mori, S; Wang, L; Takeuchi, T & Kanda, T (2004), Két új adeno-asszociált vírus cynomolgus majomból: kapszidfehérje pszeudotípusos jellemzése, Virology T. 330 (2): 375-83, PMID 15567432 
  40. ↑ 12 Bartlett, J.S .; Samulski, RJ; McCown, TJ és mások (1998), A 2-es típusú adeno-asszociált vírus szelektív és gyors felvétele az agyban, Human genetherapy 9 (8): 1181-6, PMID 9625257 
  41. ↑ Fischer, AC; Beck, SE; Smith, CI és mások (2003), Sikeres transzgénexpresszió aeroszolizált rAAV2 vektorok sorozatos dózisaival rhesus makákókban, Molekuláris terápia: az American Society of Gene Therapy folyóirata, 8. kötet (6): 918-26, PMID 14664794 
  42. ↑ Nicklin, SA; Buening, H; Dishart, KL és mások (2001), Hatékony és szelektív AAV2-közvetített géntranszfer humán vaszkuláris endothelsejtekbe, Molekuláris terápia: az American Society of Gene Therapy folyóirata, 4. kötet (3): 174-81, PMID 11545607 
  43. ↑ Rabinowitz, JE; Xiao, W & Samulski, RJ (1999), AAV2 kapszid inszerciós mutagenezis és rekombináns vírus termelése, Virology T. 265 (2): 274-85, PMID 10600599 
  44. ↑ Shi, W & Bartlett, JS (2003), Az RGD VP3-ba való bevonása adeno-asszociált 2-es típusú vírus (AAV2) alapú vektorokat biztosít heparán-szulfáttól független sejtbejutási mechanizmussal. Molekuláris terápia: az American Society of Gene Journal folyóirata Therapy T. 7 (4): 515-25, PMID 12727115 
  45. ↑ Wu, P; Xiao, W; Conlon, T és mások (2000), Az adeno-asszociált vírus 2-es típusú (AAV2) kapszidgénjének mutációs elemzése és megváltozott tropizmussal rendelkező AAV2-vektorok létrehozása, Journal of virology 74 (18): 8635-47, PMID 10954565 
  46. ↑ Manno, CS; Chew, AJ; Hutchison, S és mások (2003), AAV által közvetített IX-es faktor géntranszfer a vázizomzatba súlyos B hemofíliában szenvedő betegeknél, Blood T. 101 (8): 2963-72, PMID 12515715 
  47. ↑ Richter, M; Iwata, A; Nyhuis, J és mások (2000), Adeno-asszociált vírusvektor transzdukció vaszkuláris simaizomsejtek in vivo , Physiological genomics 2. kötet (3): 117-27, PMID 11015590 
  48. ↑ Koeberl, D. D.; Alexander, IE; Halbert, CL és mások (1997), Humán IX-es alvadási faktor tartós expressziója egérmájból adeno-asszociált vírusvektorok intravénás injekciója után, Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America, 94 (4): 1426 -31, PMID 9037069 
  49. ↑ Qing, K; Mah, C; Hansen, J és mások (1999), Az 1. humán fibroblaszt növekedési faktor receptor az adeno-asszociált vírus 2. fertőzésének társreceptora, Nature Medicine T. 5 (1): 71-7, PMID 9883842 
  50. ↑ Summerford, C & Samulski, RJ (1998), A membránnal asszociált heparán-szulfát proteoglikán az adeno-asszociált vírus 2-es típusú virionjainak receptora, Journal of virology T. 72 (2): 1438-45, PMID 9445046 
  51. ↑ Summerford, C; Bartlett, JS és Samulski, RJ (1999), AlphaVbeta5 integrin: a 2-es típusú adeno-asszociált vírusfertőzés társreceptora, Nature Medicine T. 5 (1): 78-82, PMID 9883843 
  52. ↑ Qiu, J; Handa, A; Kirby, M & Brown, KE (2000), A heparin-szulfát és az adeno-asszociált vírus kölcsönhatása 2, Virology T. 269 (1): 137-47, PMID 10725206 
  53. ↑ Pajusola, K; Gruchala, M; Joch, H és mások (2002), A sejttípus-specifikus jellemzők modulálják az adeno-asszociált 2-es típusú vírus transzdukciós hatékonyságát és visszatartják az endothelsejtek fertőzését, Journal of virology T. 76 (22): 11530-40, PMID 12388714 
  54. ↑ CNN.com (2005), A közönséges vírus „megöli a rákot” , < http://www.cnn.com/2005/HEALTH/06/22/cancer.virus/index.html > 
  55. ↑ Gao, G.P.; Alvira, M. R.; Wang, L és mások (2002), Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America, 99 (18): 11854-9, PMID 12192090 
  56. ↑ 12 Halbert , C.L.; Allen, JM és Miller, AD (2001), Adeno-asszociált vírus 6-os típusú (AAV6) vektorok közvetítik a légúti hámsejtek hatékony transzdukcióját egértüdőben, összehasonlítva az AAV2 vektorokkal, Journal of virology. (J Virol) júl; (): T. 75 (14): 6615-24, PMID 11413329 
  57. ↑ 1 2 Rabinowitz, JE; Bowles, D. E.; Faust, SM és mások (2004), Cross-dressing the virion: az adeno-asszociált vírus szerotípusok transzkapszidációja funkcionálisan meghatározza az alcsoportokat, Journal of virology 78 (9): 4421-32, PMID 15078923 
  58. ↑ Chen, S; Kapturczak, M; Loiler, SA és mások (2005), Vaszkuláris endoteliális sejtek hatékony transzdukciója rekombináns adeno-asszociált vírus 1-es és 5-ös szerotípusú vektorokkal, Human genetherapy 16 (2): 235-47, PMID 15761263 
  59. ↑ Kaludov, N; Brown, K. E.; Walters, RW és mások (2001), az Adeno-asszociált vírus 4-es szerotípusa (AAV4) és az AAV5 egyaránt sziálsav kötődést igényel a hemagglutinációhoz és a hatékony transzdukcióhoz, de különböznek a sziálsav kapcsolódás specifitásában, Journal of virology T. 75 (15): 6884- 93, PMID 11435568 
  60. ↑ Di Pasquale, G; Davidson, B. L.; Stein, CS és mások, A PDGFR azonosítása az AAV-5 transzdukció receptoraként, Nature Medicine T. 9 (10): 1306-12, PMID 14502277 
  61. ↑ Zaiss, A.K.; Liu, Q; Bowen, GP és mások (2002), Differential Activation of Innate Immune Responses by Adenovirus and Adeno-Associated Virus Vectors, Journal of Virology 76(9): 4580-90, PMID 11932423 
  62. ↑ 1 2 Zaiss, AK & Muruve, DA (2005), Immunválaszok adeno-asszociált vírusvektorokra, Current Gene Therapy 5. kötet (3): 323-31, PMID 15975009 
  63. ↑ Magas, K.A.; Mannos, CS; Pierce, GF és társai (2006), Sikeres májtranszdukció hemofíliában az AAV-IX faktorral és a gazdaszervezet immunválasz által támasztott korlátozások, Nature Medicine 12 (3): 342-47, PMID 16474400 
  64. ↑ Magas, K.A.; Sabatino, D. E.; Mingozzi, F és társai (2005), Identification of Mouse AAV Capsid-Specific CD8+ T Cell Epitopes, Molecular Therapy T. 12 (6): 1023-33, PMID 16263332 
  65. ↑ Rohr, U.P.; Kronenwett, R; Grimm, D és mások (2002), Az elsődleges emberi sejtek rAAV-2 által közvetített géntranszferrel szembeni érzékenységükben és a riportergén-expresszió időtartamában különböznek, Journal of virological methods 105 (2): 265-75, PMID 12270659 
  66. ↑ 1 2 Matsushita, T; Elliger, S; Elliger, C és mások (1998), Adeno-asszociált vírusvektorok hatékonyan előállíthatók helper vírus nélkül, Gene therapy 5 (7): 938-45, PMID 9813665 
  67. ↑ Myers, M.W.; Laughlin, CA; Jay, FT és mások (1980), Adenovírus segítő funkciója adeno-asszociált vírus növekedésében: hőmérséklet-érzékeny mutációk hatása az adenovírus korai gén régiójában 2, Journal of virology 35 (1): 65-75, PMID 6251278 
  68. ↑ Handa, H & Carter, BJ (1979), Adeno-asszociált vírus DNS-replikációs komplexei herpes simplex vírusban vagy adenovírussal fertőzött sejtekben, The Journal of biological chemistry T. 254 (14): 6603-10, PMID 221504 
  69. ↑ Yalkinoglu, A.O.; Heilbronn, R; Bürkle, A és mások (1988), Adeno-asszociált vírus DNS-amplifikációja celluláris genotoxikus stresszre adott válaszként, Cancer research 48 (11): 3123-9, PMID 2835153 
  70. ↑ Yakobson, B; Koch, T & Winocour, E (1987), Adeno-asszociált vírus replikációja szinkronizált sejtekben helper vírus hozzáadása nélkül, Journal of virology T. 61 (4): 972-81, PMID 3029431 
  71. ↑ Yakobson, B; Hrynko, T. A.; Peak, MJ és Winocour, E (1989), Adeno-asszociált vírus replikációja 254 nm-en UV fénnyel besugárzott sejtekben, Journal of virology 63 (3): 1023-30, PMID 2536816 
  72. ↑ Duan, D; Sharma, P; Yang, J és mások (1998): A rekombináns adeno-asszociált vírus cirkuláris intermedierei meghatározott szerkezeti jellemzőkkel rendelkeznek, amelyek felelősek az izomszövetben a hosszú távú episzómális perzisztenciáért, Journal of virology 72 (11): 8568-77, PMID 9765395 


Irodalom

  • Shakhbazov A.V., Severin I.N., Goncharova N.V., Grinev V.V., Kosmacheva S.M., Potapnev M.P. Vírusvektorok az emberi mezenchimális őssejtek stabil transzdukciójához: adeno-asszociált vírusokon és lentivírusokon alapuló rendszerek // Sejttechnológiák a biológiában és az orvostudományban. - 2008. - T. 4 . - S. 216-218 .