Morfolin oligonukleotidok
A morfolino-oligonukleotidok [1] [2] [3] vagy a morfolino-oligomerek [4] ( eng. morpholino, morpholino oligomer, phosphorodiamidate morpholino oligomer, PMO ) szintetikus oligonukleotidok , amelyeket a molekuláris biológiában használnak a génexpresszió megváltoztatására . A morfolin-oligonukleotid molekulaszerkezetének alapja metilén- morfolingyűrűk és foszfor -diamidát kötések . A morfolin oligonukleotidok blokkolják más molekulák hozzáférését a kis (körülbelül 25 nukleotid hosszúságú ) molekulákhoz.) specifikus szekvenciákhoz a megfelelő RNS -sel való komplementer párosítás miatt . A morfolin oligonukleotidok kutatási eszközként szolgálnak a génleütés fordított genetikájában .
A génknockdown célja, hogy megakadályozza a sejtet a megfelelő fehérje szintézisében [5] . A morfolin oligonukleotidok szintén befolyásolhatják a pre - mRNS splicingot [6] . A génknockdown egy hatékony eszköz egy adott gén működésének tanulmányozására . Hasonlóképpen, egy specifikus exon kivágása a transzkriptumból lehetővé teszi a fehérje megfelelő aminosav- maradékai által végzett funkciók meghatározását , és néha a fehérje teljes inaktiválásához vezet. A morfolin oligonukleotidokat számos modellszervezet tanulmányozására használják , beleértve az egereket , a zebrahalakat , a békákat és a tengeri sünököt [7] .
Módszereket fejlesztenek ki a morfolin-oligonukleotidok gyógyászatban történő felhasználására patogén organizmusok ( baktériumok [8] és vírusok [9] ellen ), valamint a genetikai betegségek megnyilvánulásának csökkentésére [10] .
Szerkezet
A morfolin oligonukleotidok szintetikus molekulák, amelyek módosított nukleinsavak [11] . Jellemzően 25 nukleotid hosszúak, és bázispárosodás révén komplementer módon kötődnek a megfelelő RNS- szekvenciáikhoz . A morfolin oligonukleotidok a szokásos nitrogénbázisokkal rendelkeznek, amelyek dezoxiribóz helyett morfolingyűrűkkel kapcsolódnak , és nem foszfát , hanem foszfor- odiamidát csoportok vesznek részt az egyes nukleotidok kötésében. A negatív töltésű foszfátcsoportok töltés nélküli foszfor-diamidát csoporttal való helyettesítése fiziológiás pH-értékeken megszünteti az ionizációt , így ezek a molekulák töltés nélkül maradnak az élő sejtekben. A teljes morfolin oligonukleotid molekula ilyen megváltozott nukleotidokból áll [11] .
Funkciók
A morfolin oligonukleotidok nem bontják le cél RNS-üket, ellentétben sok antiszensz molekulával (pl. kis interferáló RNS -ek és foszforotioátok ). Ehelyett "térbeli blokkolókként" működnek, mivel kötődnek a célszekvenciához, és fizikailag megakadályozzák, hogy más molekulák kötődjenek ehhez az RNS-hez [5] . A morfolin oligonukleotidokat gyakran használják specifikus mRNS-ek szerepének tanulmányozására a fejlődő embrióban. Az embriológusok zebradániák [12] , karmos békák [13] , tengeri sünök [14] és Fundulus heteroclitus hal tojásaiba vagy embrióiba fecskendezik be őket, vagy elektroporációval juttatják el ezeket a molekulákat csirkeembriókhoz a fejlődés későbbi szakaszaiban [15] ; az így kezelt embriókat morfantoknak nevezzük . A citoszolban a megfelelő szállítórendszerek jelenlétében a morfolin oligonukleotidok sejttenyészetekben is hatékonyak lehetnek [16] [17] .
Adás blokkolása
A morfolin-oligonukleotidok az mRNS 5'-végi nem transzlálódó régiójához kötődve megakadályozhatják, hogy a riboszóma eukarióta transzlációs iniciációs faktorokkal kombinálva a sapkáról a startkodonra költözzön . Ez megakadályozza a céltranszkriptum kódoló régiójának transzlációját (génleütés). Ez a technika nagyon kényelmes, ha a kutató meg akarja határozni egy adott fehérje funkcióját; a génknockdown sejtre vagy szervezetre gyakorolt hatásait használják a fehérje működésének megítélésére. Egyes morfolin-oligonukleotidok olyan hatékonyan blokkolják az expressziót, hogy az oligonukleotidok bevezetése előtt szintetizált fehérje lebomlása után ez a fehérje Western-blot -vizsgálattal kimutathatatlanná válik [18] .
Változás a pre-mRNS splicingben
A morfolin oligonukleotidok a következő módokon zavarhatják a pre-mRNS-
feldolgozást :
- a splicing-irányító kis nukleáris ribonukleoproteinek ( snRNP ) megakadályozásával, hogy a pre-mRNS intron határain kötődjenek célpontjaikhoz ;
- blokkolja az adenin maradékot , nukleofil támadást hajt végre a splicing során, és lasszó szerkezetet képez;
- zavarja a szabályozó splicing fehérjék, például a hangtompítók [19] és a splicing-fokozók [20] kötődését .
Az U1 (a donor helyen) vagy az U2 / U5 (a polipirimidin traktusban vagy az akceptor helyen) ribonukleoproteinek kötődésének megakadályozása olyan módosult splicinghez vezethet, amelyben az exonok kizáródnak az érett mRNS-ből . Más splicing helyekre gyakorolt hatás intronok beépüléséhez vezet az érett mRNS-be, míg a rejtett splicing helyek aktiválása zárványokhoz és kizárásokhoz is vezethet [21] . A morfolin oligonukleotidok blokkolhatják az snRNP U11 / U12 [22] célpontjait is . Az összeillesztésben bekövetkező változások kényelmesen követhetők reverz transzkripciós PCR (RT-PCR) és elektroforézis segítségével (az RT-PCR termékek elektroforézise során a gélben sáveltolódások figyelhetők meg) [6] .
Egyéb felhasználások
A morfolin oligonukleotidokat a mikroRNS aktivitásának [23] [24] és érésének [25] blokkolására használták . A fluoreszceinnel jelölt morfolin oligonukleotidok fluoreszcein-specifikus antitestekkel kombinálva in situ hibridizációs próbaként használhatók mikroRNS-ekkel 26] . Emellett gátolhatják a ribozimek [27] aktivitását , valamint az snRNP U2 és U12 működését [28] . A kódoló régión belüli csupasz mRNS-szekvenciákat megcélzó morfolin oligonukleotidok kereteltolódást okozhatnak a transzláció során [29] . Az RNS szerkesztését is blokkolhatják . A morfolin-oligonukleotidok hatékonysága számos célpont tekintetében univerzális eszközzé teszi őket a fehérjék vagy nukleinsavak mRNS-sel való kölcsönhatásának elnyomására [30] .
Specifikusság, stabilitás és nem antiszensz hatások
A morfolin oligonukleotidok a génleütés standard eszközeivé váltak az állati embrionális rendszerekben, amelyek több gént expresszálnak, mint a felnőtt sejtek. Morfolin-oligonukleotid befecskendezése után egy vagy több sejt stádiumában lévő béka- vagy halembriókba a legnagyobb hatás az ötödik napon jelentkezik [31] , amikor a sejtek és szövetek organogenezisének és differenciálódásának nagy része már elmaradt; a megfigyelt fenotípusok egy bizonyos gén kiütésének felelnek meg. A szekvenciákat nem célzó kontroll nukleotidok általában nem okoznak változást az embrió fenotípusában, ami megerősíti, hogy a morfolin oligonukleotidok szekvencia-specifikusan hatnak, és általában nincs nem antiszensz hatásuk. A génleütéshez szükséges dózis csökkenthető több, ugyanazt az mRNS-t megcélzó morfolin oligonukleotid egyidejű bejuttatásával; ez a megközelítés lehetővé teszi az oligonukleotidok és nem közvetlen célpontok RNS-ekkel való dózisfüggő kölcsönhatásainak csökkentését vagy teljes megszüntetését [32] .
Az embriók mRNS-ének "megmentésére" irányuló kísérletekben gyakran sikerült visszaadni a vad típusú fenotípust . E kísérletek során egy morfolin oligonukleotidot vezetnek be a sejtbe az azt a fehérjét kódoló mRNS-sel együtt, amelynek leütésére ez az oligonukleotid irányítja. A bejuttatott mRNS-nek azonban van egy módosított 5'-irányban nem transzlálódó régiója , ezért nem rendelkezik a morfolin-oligonukleotid célszekvenciájával, de a kódoló régiója megmarad, és a kérdéses fehérje szintetizálódik belőle. A „megmentő” mRNS-ből történő transzláció helyreállítja a morfolin oligonukleotid által leállított fehérje képződését. A mentő-mRNS nem okoz fenotípusos rendellenességeket, mivel nem befolyásolja azon gének expresszióját, amelyek nem a bejuttatott oligonukleotid célpontjai, így a vad típusú fenotípushoz való visszatérés újabb bizonyítéka a morfolin oligonukleotidok szekvenciaspecifitásának [31] .
A teljesen természetellenes kémiai szerkezet miatt a morfolin oligonukleotidokat a sejtfehérjék nem ismerik fel. A nukleázok nem pusztítják el őket [33] , így sem a sejtekben, sem a vérplazmában nem pusztulnak el [34] . A morfolin oligonukleotidok nem aktiválják a Toll-szerű receptorokat , és ezért nem váltanak ki veleszületett immunválaszt , amely különösen interferon képződésében vagy NF-κB által közvetített gyulladásban fejeződik ki [35] .
A morfolin-oligonukleotidok 18%-a olyan fenotípusokat okoz, amelyek nem kapcsolódnak az eredeti célpontokhoz, különösen a központi idegrendszer sejtjeinek és a szomiták pusztulásához zebradán embriókban [36] . A legtöbb ilyen hatás a p53 által közvetített apoptózis aktiválásának tulajdonítható ; elnyomhatók egy kísérleti morfolin oligonukleotid és annak anti-p53 analógjának egyidejű bejuttatásával. Ezenkívül a morfolin-oligonukleotid által kiváltott p53-mediált apoptózis aktiválása megismételhető más antiszensz struktúrák használatával, ami arra utal, hogy a p53-mediált apoptózist a célfehérje elvesztése okozhatja, és nem függ a használt oligonukleotid típusától. leütés [37] .
A morfolin oligonukleotidokat óvatosan kell használni, mivel potenciális hatásuk a célfehérjén kívülre esik. Egy második kísérlet is elvégezhető annak tesztelésére, hogy a megfigyelt morfáns fenotípus a szándékolt gén leütésének eredménye-e, vagy egy olyan RNS-sel való kölcsönhatás okozza-e, amely nem a bejuttatott oligonukleotid közvetlen célpontja. Ez a kísérlet abból áll, hogy megismételjük a morfáns fenotípusát ( fenokópiáját ) egy másik morfolin oligonukleotiddal, amely ugyanazt a célpontot célozza meg, de nem fedi át az első oligonukleotidot [31] .
Szállítás
Ahhoz, hogy egy morfolin oligonukleotid működjön, be kell jutnia a sejt citoszoljába, és át kell jutnia a sejtmembránon . A citoszolba való belépés után az szabadon diffundálni kezd a citoszol és a sejtmag között, amint azt az olyan kísérletek is kimutatták, amelyekben egy morfolin nukleotid bejuttatása a sejt citoszoljába megváltoztatta a sejtmag splicingjét [6] . Különféle módszereket alkalmaznak a morfolin oligonukleotidok embriókba, tenyésztősejtekbe vagy felnőtt állati sejtekbe történő eljuttatására.
Általában mikroinjekciókat használnak az embriókba való bejuttatásra, és az oligonukleotidok bejuttatását általában egy vagy több sejt stádiumában végzik [38] . A morfolin oligonukleotidok embriókba juttatásának alternatív módszere az elektroporáció, amely lehetővé teszi, hogy az embrionális fejlődés későbbi szakaszaiban a szövetekbe kerüljenek [39] .
A morfolin oligonukleotidok tenyésztési sejtekbe való bejuttatásának leggyakoribb módszerei egy endoporter peptid alkalmazása , amely morfolin oligonukleotidok felszabadulását okozza az endoszómákból [17] ; speciális bejuttatási rendszer , amely egy morfolin oligonukleotidot és etoxilezett polietilénimint tartalmazó DNS- heteroduplexet tartalmaz szállító reagensként (a kereskedelemben már nem kapható) [16] ; elektroporáció [40] ; kaparás terhelési módszer [ 41 ] . 2015-ben egy DNS-alapú transzaktiváló amfipatikus szállítórendszert írtak le, amelyet úgy terveztek, hogy kényelmesen szállítson poli(A)-farokkal rendelkező töltés nélküli nukleinsavakat, például peptidonukleinsavakat és morfolin-oligonukleotidokat [42] .
A morfolin oligonukleotidok felnőtt állatok szöveteibe való bejuttatása nehéz, bár számos rendszert fejlesztettek ki a módosítatlan morfolin oligonukleotidok szövetekbe való eljuttatására (különösen a Duchenne-i izomdisztrófia esetén természetesen gyenge izomsejtekhez [43] vagy a stressz alatt álló vaszkuláris endotélsejtekhez angioplasztika [44] ). Bár a morfolin oligonukleotidok hatékonyan áthaladnak a szövetek sejtközi terein, a sejtekhez való eljuttatásuk nehéz. A sejtbe hatoló peptidekhez kovalensen kötött morfolin - oligonukleotidok segítségével számos sejttípusba történő szisztémás bejuttatás valósítható meg , és míg a kötött peptidek közepes dózisai toxikus hatásúak [ 45 ] [46] , in vivo körülmények között. , lehetővé vált a morfolin-oligonukleotidok hatékony szállítása a peptidek toxikusnál kisebb dózisainál [9] [47] . Egy morfolin oligonukleotid (úgynevezett Vivo-Morpholino) végéhez kapcsolódó oktaguanidin dendrimer biztosítja annak a vérből a citoszolba való eljuttatását, ha szisztematikusan befecskendezik egy felnőtt állatba [48] [49] .
Orvosi jelentősége
A hatékony szállításra képes morfolin oligonukleotidok (mint például a peptidhez kötött morfolin oligonukleotidok és a Vivo-Morpholino) ígéretes szerek lehetnek vírusos és genetikai betegségek kezelésében [50] . Például a Sarepta Therapeutics Inc. már fejleszti a morfolin oligonukleotidokat, a NeuGene nevű potenciális gyógyszert. Jelenleg klinikai vizsgálatok folynak a morfolin-oligonukleotidokkal , amelyek felhasználhatók Duchenne-miodisztrófia kezelésére emberekben [51] .
Jegyzetek
- ↑ Appel et al., 2013 , p. 206.
- ↑ P. V. Zolotukhin, Yu. A. Lebedeva, O. N. Kuzminova, E. K. Brjuhanov. Nukleinsavak módosításai és analógjai: a modern molekuláris biológia eszközei // Valeológia. - 2013. - 2. sz . - S. 27-33 . — ISSN 2218-2268 .
- ↑ N. M. Belonogov. "Közvetlen" és "fordított" genetika. A kvantitatív tulajdonságok genetikája // Vavilov Journal of Genetics and Breeding. - 2014. - T. 18 , 1. sz . - S. 147-157 .
- ↑ T. V. Abramova, V. N. Szilnyikov. A szénhidrát-foszfát váz által módosított nukleinsavak oligonukleotid-analógjainak és mimetikumainak szintézise és tulajdonságai // Usp. chem.. - 2011. - T. 80 , 5. sz . - S. 452-476 .
- ↑ 1 2 Summerton J. Morpholino antiszensz oligomerek: egy RNáz H-független szerkezeti típus esete. (angol) // Biochimica et biophysica acta. - 1999. - 1. évf. 1489. sz. 1 . - P. 141-158. — PMID 10807004 .
- ↑ 1 2 3 Draper BW , Morcos PA , Kimmel CB Zebrafish fgf8 pre-mRNS splicing gátlása morfolino oligókkal: számszerűsíthető módszer a génknockdownra. (angol) // Genesis (New York, NY: 2000). - 2001. - 20. évf. 30, sz. 3 . - P. 154-156. — PMID 11477696 .
- ↑ Heasman J. Morpholino oligos: értelmes az antiszensz? (angol) // Fejlődésbiológia. - 2002. - 20. évf. 243. sz. 2 . - P. 209-214. - doi : 10.1006/dbio.2001.0565 . — PMID 11884031 .
- ↑ Geller BL Antibakteriális antiszensz. (angol) // Jelenlegi vélemény a molekuláris terápiában. - 2005. - 20. évf. 7, sz. 2 . - P. 109-113. — PMID 15844617 .
- ↑ 1 2 Deas TS , Bennett CJ , Jones SA , Tilgner M. , Ren P. , Behr MJ , Stein DA , Iversen PL , Kramer LD , Bernard KA , Shi PY Morpholino oligomerek in vitro rezisztencia szelekciója és in vivo hatékonysága West ellen Nílusvírus. (angol) // Antimikrobiális szerek és kemoterápia. - 2007. - Vol. 51. sz. 7 . - P. 2470-2482. - doi : 10.1128/AAC.00069-07 . — PMID 17485503 .
- ↑ McClorey G. , Fall AM , Moulton HM , Iversen PL , Rasko JE , Ryan M. , Fletcher S. , Wilton SD Indukált disztrofin exon kihagyása emberi izomexplantátumokban. (angol) // Neuromuszkuláris rendellenességek: NMD. - 2006. - Vol. 16. sz. 9-10 . - P. 583-590. - doi : 10.1016/j.nmd.2006.05.017 . — PMID 16919955 .
- ↑ 1 2 Summerton J. , Weller D. Morpholino antiszensz oligomerek: tervezés, előállítás és tulajdonságok. (angol) // Antiszensz és nukleinsav gyógyszerfejlesztés. - 1997. - 1. évf. 7, sz. 3 . - P. 187-195. — PMID 9212909 .
- ↑ Nasevicius A. , Ekker SC Hatékony célzott gén „leütés” zebrahalban. (angol) // Természetgenetika. - 2000. - Vol. 26. sz. 2 . - P. 216-220. - doi : 10.1038/79951 . — PMID 11017081 .
- ↑ Heasman J. , Kofron M. , Wylie C. A Xenopus korai embriójában boncolt béta-catenin jelátviteli tevékenység: újszerű antiszensz megközelítés. (angol) // Fejlődésbiológia. - 2000. - Vol. 222. sz. 1 . - P. 124-134. doi : 10.1006 / dbio.2000.9720 . — PMID 10885751 .
- ↑ Howard EW , Newman LA , Oleksyn DW , Angerer RC , Angerer LM SpKrl: a tengeri sünök embrióiban az endoderma differenciálódásához szükséges béta-katenin szabályozás közvetlen célpontja. (angol) // Fejlesztés (Cambridge, Anglia). - 2001. - 20. évf. 128. sz. 3 . - P. 365-375. — PMID 11152635 .
- ↑ Kos R. , Reedy MV , Johnson RL , Erickson CA A FoxD3 szárnyas-hélix transzkripciós faktor fontos az idegi címervonal kialakításában és a melanogenezis visszaszorításában madárembriókban. (angol) // Fejlesztés (Cambridge, Anglia). - 2001. - 20. évf. 128. sz. 8 . - P. 1467-1479. — PMID 11262245 .
- ↑ 1 2 Morcos PA Morpholino oligók hatékony szállítása tenyésztett sejtekben. (angol) // Genesis (New York, NY: 2000). - 2001. - 20. évf. 30, sz. 3 . - P. 94-102. — PMID 11477682 .
- ↑ 1 2 Summerton JE Endo-Porter: újszerű reagens az anyagok biztonságos, hatékony sejtekbe juttatásához. (angol) // A New York-i Tudományos Akadémia évkönyvei. - 2005. - 20. évf. 1058. - P. 62-75. doi : 10.1196 / annals.1359.012 . — PMID 16394126 .
- ↑ Stancheva I. , Collins AL , Van den Veyver IB , Zoghbi H. , Meehan RR A humán Rett-szindrómával összefüggő MeCP2 fehérje mutáns formáját nem lehet bevágással kiszorítani a metilált DNS-ből Xenopus embriókban. (angol) // Molekuláris sejt. - 2003. - 20. évf. 12, sz. 2 . - P. 425-435. — PMID 14536082 .
- ↑ Bruno IG , Jin W. , Cote GJ Az aberráns FGFR1 alternatív RNS splicing korrekciója az intronikus szabályozóelemek megcélzásával. (angol) // Humán molekuláris genetika. - 2004. - 20. évf. 13. sz. 20 . - P. 2409-2420. doi : 10.1093 / hmg/ddh272 . — PMID 15333583 .
- ↑ Vetrini F. , Tammaro R. , Bondanza S. , Surace EM , Auricchio A. , De Luca M. , Ballabio A. , Marigo V. Az 1-es típusú okuláris albinizmus génjében (OA1/GPR143) in vitro korrigált aberráns splicing morfolino antiszensz oligonukleotidokkal. (angol) // Humán mutáció. - 2006. - Vol. 27. sz. 5 . - P. 420-426. - doi : 10.1002/humu.20303 . — PMID 16550551 .
- ↑ Morcos PA Célzott és számszerűsíthető mRNS-splicing változás elérése Morpholino oligókkal. (angol) // Biokémiai és biofizikai kutatási kommunikáció. - 2007. - Vol. 358. sz. 2 . - P. 521-527. - doi : 10.1016/j.bbrc.2007.04.172 . — PMID 17493584 .
- ↑ König H. , Matter N. , Bader R. , Thiele W. , Müller F. Splicing szegregáció: a minor spliceosoma a sejtmagon kívül működik, és szabályozza a sejtproliferációt. (angol) // Cell. - 2007. - Vol. 131. sz. 4 . - P. 718-729. - doi : 10.1016/j.cell.2007.09.043 . — PMID 18022366 .
- ↑ Kloosterman WP , Wienholds E. , Ketting RF , Plasterk RH Aljzatkövetelmények az let-7 funkcióhoz a fejlődő zebradánembrióban. (angol) // Nukleinsavak kutatása. - 2004. - 20. évf. 32. sz. 21 . - P. 6284-6291. doi : 10.1093 / nar/gkh968 . — PMID 15585662 .
- ↑ Flynt AS , Li N. , Thatcher EJ , Solnica-Krezel L. , Patton JG A Zebrafish miR-214 modulálja a Hedgehog jelátvitelt, hogy meghatározza az izomsejtek sorsát. (angol) // Természetgenetika. - 2007. - Vol. 39. sz. 2 . - P. 259-263. - doi : 10.1038/ng1953 . — PMID 17220889 .
- ↑ Kloosterman WP , Lagendijk AK , Ketting RF , Moulton JD , Plasterk RH A miRNS érés célzott gátlása morfolinokkal a miR-375 szerepét tárja fel a hasnyálmirigy-szigetek fejlődésében. (angol) // Public Library of Science Biology. - 2007. - Vol. 5, sz. 8 . — P. e203. - doi : 10.1371/journal.pbio.0050203 . — PMID 17676975 .
- ↑ Lagendijk AK , Moulton JD , Bakkers J. Felfedő részletek: teljes mount microRNS in situ hibridizációs protokoll zebradán embriókhoz és felnőtt szövetekhez. (angol) // Biológia nyitva. - 2012. - Kt. 1, sz. 6 . - P. 566-569. - doi : 10.1242/bio.2012810 . — PMID 23213449 .
- ↑ Yen L. , Svendsen J. , Lee JS , Gray JT , Magnier M. , Baba T. , D'Amato RJ , Mulligan RC Emlősök génexpressziójának exogén szabályozása az RNS önhasításának modulációján keresztül. (angol) // Természet. - 2004. - 20. évf. 431. sz. 7007 . - P. 471-476. - doi : 10.1038/nature02844 . — PMID 15386015 .
- ↑ Matter N. , König H. A spliceoszóma funkció célzott „leütése” emlőssejtekben. (angol) // Nukleinsavak kutatása. - 2005. - 20. évf. 33. sz. 4 . — P. e41. - doi : 10.1093/nar/gni041 . — PMID 15731334 .
- ↑ Howard MT , Gesteland RF , Atkins JF . Helyspecifikus riboszóma kereteltolódás hatékony stimulálása antiszensz oligonukleotidokkal. (angol) // RNA (New York, NY). - 2004. - 20. évf. 10, sz. 10 . - P. 1653-1661. - doi : 10.1261/rna.7810204 . — PMID 15383681 .
- ↑ Penn AC , Balik A. , Greger IH Az AMPA receptor Q/R szerkesztésének szterikus antiszensz gátlása szoros kapcsolódást mutat az intronikus szerkesztési helyekhez és a splicinghez. (angol) // Nukleinsavak kutatása. - 2013. - Kt. 41. sz. 2 . - P. 1113-1123. - doi : 10.1093/nar/gks1044 . — PMID 23172291 .
- ↑ 1 2 3 Bill BR , Petzold AM , Clark KJ , Schimmenti LA , Ekker SC Alapozó morfolinos felhasználásra zebrahalban. (angol) // Zebrafish. - 2009. - 1. évf. 6, sz. 1 . - P. 69-77. doi : 10.1089 / zeb.2008.0555 . — PMID 19374550 .
- ↑ Kamachi Y. , Okuda Y. , Kondoh H. Morpholino antiszensz oligonukleotidok knockdown hatékonyságának kvantitatív értékelése zebradán embriókban luciferáz vizsgálattal. (angol) // Genesis (New York, NY: 2000). - 2008. - Vol. 46, sz. 1 . - P. 1-7. - doi : 10.1002/dvg.20361 . — PMID 18196596 .
- ↑ Hudziak RM , Barofsky E. , Barofsky DF , Weller DL , Huang SB , Weller DD Morpholino phosphorodiamidate oligomerek ellenállása az enzimes lebontással szemben. (angol) // Antiszensz és nukleinsav gyógyszerfejlesztés. - 1996. - 1. évf. 6, sz. 4 . - P. 267-272. — PMID 9012862 .
- ↑ Youngblood DS , Hatlevig SA , Hassinger JN , Iversen PL , Moulton HM A sejtbe hatoló peptid-morfolino oligomer konjugátumok stabilitása humán szérumban és sejtekben. (angol) // Biokonjugált kémia. - 2007. - Vol. 18, sz. 1 . - 50-60. doi : 10.1021 / bc060138s . — PMID 17226957 .
- ↑ John D. Moulton. A Morpholino Antisense rövid bemutatása. – 2011.
- ↑ Ekker SC , Larson JD Morphant technológia modellfejlesztő rendszerekben. (angol) // Genesis (New York, NY: 2000). - 2001. - 20. évf. 30, sz. 3 . - P. 89-93. — PMID 11477681 .
- ↑ Robu ME , Larson JD , Nasevicius A. , Beiraghi S. , Brenner C. , Farber SA , Ekker SC p53 aktiválása knockdown technológiákkal. (angol) // PLoS genetika. - 2007. - Vol. 3, sz. 5 . - P. e78. - doi : 10.1371/journal.pgen.0030078 . — PMID 17530925 .
- ↑ Rosen JN , Sweeney MF , Mably JD Zebradán embriók mikroinjekciója a génfunkciók elemzésére. (angol) // Journal of visualized experiments : JoVE. - 2009. - Nem. 25 . - doi : 10.3791/1115 . — PMID 19274045 .
- ↑ Cerda GA , Thomas JE , Allende ML , Karlstrom RO , Palma V. Electroporation of DNA, RNA, and morpholinos into zebrafish embrios. (angol) // Módszerek (San Diego, Kalifornia). - 2006. - Vol. 39. sz. 3 . - P. 207-211. - doi : 10.1016/j.ymeth.2005.12.009 . — PMID 16837210 .
- ↑ Jubin R. Elektroporációs körülmények optimalizálása a morfolino antiszensz oligonukleotidok intracelluláris bejuttatásához, amelyek a hepatitis C vírus belső riboszóma belépési helye ellen irányulnak. (angol) // Módszerek a molekuláris gyógyászatban. - 2005. - 20. évf. 106. - P. 309-322. — PMID 15375324 .
- ↑ Partridge M. , Vincent A. , Matthews P. , Puma J. , Stein D. , Summerton J. Egy egyszerű módszer morfolino antiszensz oligók szállítására a sejtek citoplazmájába. (angol) // Antiszensz és nukleinsav gyógyszerfejlesztés. - 1996. - 1. évf. 6, sz. 3 . - P. 169-175. — PMID 8915501 .
- ↑ H. V. Jain, D. Verthelyi és S. L. Beaucage. Amfipatikus transz-ható foszforotioát DNS-elemek közvetítik a töltetlen nukleinsavszekvenciák szállítását emlőssejtekben // RSC Adv.. - 2015. - Vol. 5. - P. 65245-65254. - doi : 10.1039/C5RA12038A .
- ↑ Fletcher S. , Honeyman K. , Fall AM , Harding PL , Johnsen RD , Wilton SD Dystrophin expresszió mdx egérben morfolino antiszensz oligonukleotid lokalizált és szisztémás beadása után. (angol) // A génmedicina folyóirata. - 2006. - Vol. 8, sz. 2 . - P. 207-216. - doi : 10.1002/jgm.838 . — PMID 16285002 .
- ↑ Kipshidze NN , Kim HS , Iversen P. , Yazdi HA , Bhargava B. , New G. , Mehran R. , Tio F. , Haudenschild C. , Dangas G. , Stone GW , Iyer S. , Roubin GS , Leon MB , Moses JW A fejlett antiszensz oligonukleotidok intramurális coronaria bejuttatása csökkenti a neointimális képződést a sertés stent resztenózis modelljében. (angol) // Az American College of Cardiology folyóirata. - 2002. - 20. évf. 39. sz. 10 . - P. 1686-1691. — PMID 12020498 .
- ↑ Abes S. , Moulton HM , Clair P. , Prevot P. , Youngblood DS , Wu RP , Iversen PL , Lebleu B. A morfolino-oligomerek (R-Ahx-R)4 peptiddel történő vektorizálása hatékony splicing korrekciót tesz lehetővé hiányában endoszomolitikus szerek. (angol) // Journal of controlled release : a Controlled Release Society hivatalos lapja. - 2006. - Vol. 116. sz. 3 . - P. 304-313. - doi : 10.1016/j.jconrel.2006.09.011 . — PMID 17097177 .
- ↑ Burrer R. , Neuman BW , Ting JP , Stein DA , Moulton HM , Iversen PL , Kuhn P. , Buchmeier MJ . Antiszensz morfolino oligomerek vírusellenes hatásai rágcsáló koronavírus fertőzési modellekben. (angol) // Virológiai folyóirat. - 2007. - Vol. 81. sz. 11 . - P. 5637-5648. - doi : 10.1128/JVI.02360-06 . — PMID 17344287 .
- ↑ Amantana A. , Moulton HM , Cate ML , Reddy MT , Whitehead T. , Hassinger JN , Youngblood DS , Iversen PL A sejtbe hatoló peptid-morfolino-oligomer konjugátum farmakokinetikája, biológiai eloszlása, stabilitása és toxicitása. (angol) // Biokonjugált kémia. - 2007. - Vol. 18, sz. 4 . - P. 1325-1331. doi : 10.1021 / bc070060v . — PMID 17583927 .
- ↑ Li YF , Morcos PA Dendrites molekuláris transzporter tervezése és szintézise, amely morfolino antiszensz oligo hatékony in vivo szállítását biztosítja. (angol) // Biokonjugált kémia. - 2008. - Vol. 19, sz. 7 . - P. 1464-1470. - doi : 10.1021/bc8001437 . — PMID 18564870 .
- ↑ Morcos PA , Li Y. , Jiang S. Vivo-Morpholinos: egy nem peptid transzporter szállítja a Morpholinokat az egérszövetek széles skálájába. (angol) // BioTechniques. - 2008. - Vol. 45, sz. 6 . - P. 613-614. — PMID 19238792 .
- ↑ Moulton JD , Jiang S. Génleütések felnőtt állatokban: PPMO-k és vivo-morfolinók. (angol) // Molekulák (Basel, Svájc). - 2009. - 1. évf. 14. sz. 3 . - P. 1304-1323. - doi : 10,3390/molecules14031304 . — PMID 19325525 .
- ↑ Az AVI-4658 hatékonysági vizsgálata a dystrophin expresszió indukálására kiválasztott Duchenne-izomdystrophiás betegekben . Letöltve: 2015. október 25. Az eredetiből archiválva : 2015. december 8.. (határozatlan)
Irodalom
Linkek