Mesterséges bakteriális kromoszóma
A mesterséges bakteriális kromoszóma ( bakteriális mesterséges kromoszóma, BAC ) az E. coli F-plazmidján, a lambda fág cos régióin és a P1 fág loxP régióin alapuló vektorrendszer , amelyet hosszú (150–150–150) klónozásra használnak. 350 [1] kb ) ) DNS szekvenciák [2] [3] [4] . Az F-plazmid olyan géneket kódol, amelyek szabályozzák a replikációt és a kópiaszámot (1-2 molekula sejtenként). A plazmid DNS loxP régióját a P1 fág Cre fehérje, a cos régiót pedig a lambda fág megfelelő enzime hasítja. Hasonló vektorrendszer, az úgynevezett PAC ( p1-eredetű mesterséges kromoszóma ) a P1 fág DNS-éből származó bakteriális P1 plazmid alapján készült.
Mesterséges bakteriális kromoszómákat gyakran használnak az organizmusok genomjának szekvenálására különböző projektekben, például a Human Genome Projectben . A vizsgált szervezetből származó DNS egy rövid darabját beillesztik egy kromoszómába, majd amplifikálják és szekvenálják. Ezt követően a beolvasott szekvenciákat in silico igazítják egymáshoz , ami a szervezet genomjának teljes szekvenciáját eredményezi. Ezt a megközelítést mára felváltották a gyorsabb és kevésbé munkaigényes szekvenálási módszerek, például a shotgun módszer vagy a következő generációs szekvenálási módszerek .
Genetikai komponensek
repE
szabályozza a plazmid replikációját és másolatainak számát.
parA és parB
az F-plazmid DNS-nek a leánysejtekbe való szétosztására az osztódás és a kromoszóma stabil fenntartása során.
szelektív marker
gyakran
egy antibiotikum rezisztencia gén ; néhány
lacZ -t is tartalmaz a génklónozás helyén, ami lehetővé teszi a kék-fehér szelekciót.
T7 és Sp6
fág promoterek a beépített gének transzkripciójához.
Lásd még
- Mesterséges emberi kromoszóma
- Mesterséges élesztő kromoszóma
- Fosmid
- Cosmid
Jegyzetek
- ↑ Stone NE, Fan JB, Willour V., Pennacchio LA , Warrington JA, Hu A., Chapelle A., Lehesjoki AE, Cox DR, Myers RM Egy 750 kb-os bakteriális klón kontig és restrikciós térkép építése az emberi régióban a progresszív myoclonus epilepsia gént tartalmazó 21. kromoszóma // Genome Research : folyóirat. - 1996. - 1. évf. 6 , sz. 3 . - P. 218-225 . - doi : 10.1101/gr.6.3.218 . — PMID 8963899 .
- ↑ O'Connor M., Peifer M., Bender W. Nagy DNS-szegmensek építése Escherichia coliban // Science : Journal. - 1989. - 1. évf. 244 , sz. 4910 . - P. 1307-1312 . - doi : 10.1126/tudomány.2660262 . — PMID 2660262 .
- ↑ Shizuya H., Birren B., Kim UJ, Mancino V., Slepak T., Tachiiri Y., Simon M. Emberi DNS 300 kilobázispáros fragmentumainak klónozása és stabil fenntartása Escherichia coliban F-faktor segítségével alapú vektor (angol) // Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America : Journal. - 1992. - 1. évf. 89 , sz. 18 . - P. 8794-8797 . - doi : 10.1073/pnas.89.18.8794 . — PMID 1528894 .
- ↑ Shizuya, H; Kouros Mehr Hosein. A bakteriális mesterséges kromoszóma klónozó rendszer fejlesztése és alkalmazása // Keio J Med. : folyóirat. - 2001. - 20. évf. 50 , sz. 1 . - P. 26-30 . - doi : 10.2302/kjm.50.26 . — PMID 11296661 .