Az áramlási citometria (áramlási citometria) egy módszer a diszpergált közegek tanulmányozására a diszpergált fázis elemeinek részleges analízisével, fényszórási és fluoreszcens jelek segítségével . A módszer neve a fő alkalmazási területhez kapcsolódik, nevezetesen egyetlen biológiai sejtek vizsgálatához egy patakban.
A módszer alapja: 1) hidrofókuszáló rendszer alkalmazása, amely biztosítja a sejtek egyenkénti áthaladását egy áramban; 2) sejtbesugárzás lézersugárzással; 3) az egyes sejtekből származó fényszórási és fluoreszcens jelek regisztrálása.
Ezenkívül az elemzés figyelembe veszi a sejtet alkotó kémiai vegyületek fluoreszcenciájának szintjét (autofluoreszcencia), vagy az áramlási citometria előtt a mintába bevitt kémiai vegyületek szintjét.
A sejtszuszpenzió, amelyet korábban fluoreszcens monoklonális antitestekkel vagy fluoreszcens festékekkel jelöltek meg, belép az áramlási cellán áthaladó folyadékáramba. A feltételeket úgy választják ki, hogy a sejtek egymás után sorakoznak fel az ún. egy sugár hidrodinamikus fókuszálása egy sugárban. A hidrodinamikus fókuszálást a külső sugárban (jet-sheath) a fajlagos mintaáramhoz képest nagy fajlagos áramlási sebesség biztosítja. Sematikusan a működési elvet a videó mutatja. Ahogy a külső sugárban a fajlagos áramlási sebesség nő, a cellák egymás után sorakoznak fel. Abban a pillanatban, amikor a cella keresztezi a lézersugarat, a detektorok rögzítik:
A szórás intenzitása függ a sejt morfológiájától (méret, alak, belső szerkezet), a sejtnek az áramlásban a beeső sugárzás irányához viszonyított orientációjától, valamint a beeső sugárzás polarizációs állapotától.
A fluoreszcencia intenzitását két tényező határozza meg: a specifikus fluoreszcencia és az autofluoreszcencia. A specifikus fluoreszcencia olyan fluorokróm molekulák kibocsátásával jár, amelyek specifikusan kapcsolódnak bizonyos sejtkomponensekhez (receptorok, intracelluláris fehérjék, DNS stb.). Az autofluoreszcencia a sejt saját molekuláinak (fehérjék, nukleinsavak stb.) kibocsátásával jár. A fajlagos fluoreszcencia intenzitása függ a sejtben lévő fluorokróm molekulák számától, a gerjesztő sugárzás hullámhosszától, a fluorokróm abszorpciós (kioltási) keresztmetszetétől ezen a hullámhosszon, a fluorokróm kvantumhozamától , az optikai sugárzás numerikus apertúrájától. fluoreszcencia gyűjtőrendszer, valamint az optikai szűrő és detektáló rendszer spektrális tartománya. Az autofluoreszcencia intenzitása hasonlóképpen függ a sejt saját molekuláinak optikai tulajdonságaitól. A gyakorlatban a mérés előtti sejt-előkészítést úgy végezzük, hogy a fajlagos fluoreszcencia hozzájárulása több nagyságrenddel meghaladja az autofluoreszcencia hozzájárulását.
A sejtek áramlási citometriával történő elemzésére szolgáló eszközöket áramlási citométereknek vagy áramlási citométereknek nevezik . Oroszországban és a FÁK-ban a legnépszerűbb áramlási citométerek a Beckman Coulter Life Sciences [1] és a Becton Dickinson Biosciences .
Tandem színezékek:
"Kvantumpontok" QD560, QD590 stb.
| Patológia az orvostudományban | |
|---|---|
| patohistológia | Sejtkárosodás apoptózis Nekrobiózis kariopiknózis karyorrhexis kariolízis Elhalás koagulációs nekrózis kollikvációs nekrózis üszkösödés zárolás szívroham Sejtes adaptáció Sorvadás Hipertrófia Hiperplázia Diszplázia Metaplasia pikkelyes mirigyes Disztrófia Fehérje zsíros szénhidrát Ásványi |
| Tipikus kóros folyamatok |
|
| Laboratóriumi diagnosztika és boncolás |
|