Fehérje elektroforézis

A fehérjeelektroforézis a fehérjék  keverékének frakciókra vagy egyedi fehérjékre való szétválasztásának módszere, amely különböző molekulatömegű töltött fehérjemakromolekulák stacionárius elektromos térben történő mozgásán alapul . A fehérjeelektroforézist a fehérjekeverék komponenseinek elemzésére és homogén fehérje előállítására egyaránt alkalmazzák. A fehérje elektroforetikus analízis leggyakoribb változata a Laemmli poliakrilamid gélelektroforézis [2] [3] .

A fehérjeelektroforézis módszer változatai

Ennek a módszernek számos változata és módosítása létezik, amelyeket különféle területeken alkalmaznak (vagy alkalmaztak bizonyos időszakokban a biokémia és a molekuláris biológia fejlődésében ) [3] :

A fehérjeelektroforézis egydimenziós és kétdimenziós (2D) elektroforézisre [6] , preparatív és analitikai, valamint natív fehérje elektroforézisre és detergens jelenlétében ( denaturáló körülmények között) végzett elektroforézisre is fel van osztva. Az elektroforézis módszer egyik változata az izoelektromos fókuszálás és az izotachoforézis . Az elválasztott fehérjék kimutatására alkalmazott immunológiai módszerek esetében immunelektroforézisről beszélnek .

Az elektroforetikus berendezés kialakításától függően vízszintes és függőleges fehérjeelektroforézist különböztetnek meg.

Előzmények és alkalmazások

Az 1930-as és 1940-es években számos laboratóriumban, köztük az elektroforézis úttörőjénél, a Nobel-díjas Arne Tiseliusnál [7] végzett első elektroforéziskísérletek után 1955-ben jelentős előrelépés történt ennek a fehérjeleválasztási módszernek a továbbfejlesztésében és alkalmazásában. a zonális keményítőgél elektroforézis kifejlesztése a később szintén Nobel-díjas Oliver Smithies által [4] [8] . A módszert továbbfejlesztették [9] [10] , és széles körben alkalmazták a kísérleti biokémiában és a molekuláris biológiában.

1959-ben a fehérje elektroforézis módszerét javasolták PAAG-ban [ 5] , 1962-ben - a korongelektroforézis módszerét [11] , 1969-ben - a denaturáló szerek ( SDS ) alkalmazását [12] . 1970-ben Laemmli jelentősen javította a PAAG elektroforézisét, elválasztva a T4 bakteriofág 28 fehérjekomponensét [2] . 1975-ben jelent meg a kétdimenziós (2D) elektroforézis [6] .

A fehérjeelektroforézis széles körben alkalmazható a biológiai kutatásokban, mind az alapvető [2] [4] [13] , mind az alkalmazott [14] [15] [16] [17] [18] területén . A módszer számos változata ma is használatos; például a 2D elektroforézis az egyik módszer a proteom vizsgálatára a proteomikában [19] .

Lásd még

Jegyzetek

  1. ↑ Schägger H. , von Jagow G. Tricin-nátrium-dodecil-szulfát-poliakrilamid gélelektroforézis fehérjék elválasztására 1-100 kDa tartományban  // Analytical Biochemistry  : Journal  . - Orlando, FL , USA : Academic Press , 1987. - Vol. 166. sz. 2 . - P. 368-379. — ISSN 0003-2697 . — PMID 2449095 .  (Hozzáférés dátuma: 2015. február 27.) Archivált másolat (hivatkozás nem elérhető) . Letöltve: 2020. október 13. Az eredetiből archiválva : 2018. április 6.. 
  2. ↑ 1 2 3 Laemmli UK . Strukturális fehérjék hasítása a T4 bakteriofág fejének összeszerelése során  (angol)  // Nature  : Journal. - London , Egyesült Királyság : Nature Publishing Group , 1970. - Vol. 227. sz. 5259 . - P. 680-685. — ISSN 1476-4687 . - doi : 10.1038/227680a0 . — PMID 5432063 . Archiválva az eredetiből 2015. február 27-én.  (Hozzáférés: 2015. február 27.)
  3. ↑ 1 2 Osterman L. A. Fehérjék és nukleinsavak vizsgálati módszerei: elektroforézis és ultracentrifugálás (gyakorlati útmutató). — M .: Nauka , 1981. — 288 p.
  4. ↑ 1 2 3 Smithies O. Zone elektroforézis keményítő gélekben: csoportos variációk normál emberi felnőttek szérumfehérjéiben  (angolul)  // The Biochemical Journal  : Journal. – London, Egyesült Királyság: Biochemical Society ; Portland Press , 1955. évf. 61. sz. 4 . - P. 629-641. — ISSN 0264-6021 . — PMID 13276348 . Archiválva az eredetiből 2015. február 27-én.  (Hozzáférés: 2015. február 27.)
  5. ↑ 1 2 Raymond S., Weintraub L. Akrilamid gél, mint támogató közeg a zónaelektroforézishez  // Science  :  Journal. - Washington, DC , USA: American Association for the Advancement of Science , 1959. - Vol. 130, sz. 3377 . - P. 711. - ISSN 0036-8075 . — PMID 14436634 .  (Hozzáférés dátuma: 2015. február 27.) Archivált másolat (hivatkozás nem elérhető) . Letöltve: 2020. október 13. Az eredetiből archiválva : 2017. október 6.. 
  6. ↑ 1 2 O'Farrell PH Fehérjék nagy felbontású kétdimenziós elektroforézise  (angol)  // The Journal of Biological Chemistry : folyóirat. - Baltimore, MD , USA: American Society for Biochemistry and Molecular Biology , 1975. - Vol. 250, sz. 10 . - P. 4007-4021. — ISSN 4406-4412 . — PMID 236308 .  (Hozzáférés dátuma: 2015. február 27.) Archivált másolat (hivatkozás nem elérhető) . Letöltve: 2015. február 27. Az eredetiből archiválva : 2020. január 18.. 
  7. ↑ Tiselius A. Új készülék kolloid keverékek elektroforetikus elemzésére  (angol)  // Transactions of the Faraday Society  : folyóirat. - London, Egyesült Királyság: Faraday Society , 1937. - 20. évf. 33. - P. 524-531. — ISSN 0014-7672 . - doi : 10.1039/TF9373300524 .  (Hozzáférés: 2015. február 28.) Archív másolat (hivatkozás nem elérhető) . Letöltve: 2020. október 13. Az eredetiből archiválva : 2020. augusztus 10. 
  8. ↑ Elektroforézis: elmélet, módszerek és alkalmazások / Szerk. írta M. Bier. — 3. nyomdai edn. - New York, NY , USA: Academic Press, 1964. - P. 225. - 563 p.  (angol)  (Hozzáférés dátuma: 2015. február 27.) Archivált másolat (elérhetetlen link) . Letöltve: 2015. február 27. Az eredetiből archiválva : 2017. október 5.. 
  9. ↑ Smithies O. Egy továbbfejlesztett eljárás keményítő-gél elektroforézishez: további eltérések normál egyének szérumfehérjéiben  //  The Biochemical Journal : Journal. – London, Egyesült Királyság: Biochemical Society; Portland Press, 1959. évf. 71. sz. 3 . - P. 585-587. — ISSN 0264-6021 . — PMID 13638269 . Archiválva az eredetiből 2015. február 27-én.  (Hozzáférés: 2015. február 27.)
  10. ↑ Gahne B. Tanulmányok a transzferrinek, albuminok, prealbuminok és plazmaészterázok elektroforetikus formáinak öröklődéséről  // Genetics  :  Journal. - Baltimore, MD, USA: Genetics Society of America , 1966. - Vol. 53. sz. 4 . - P. 681-694. — ISSN 0016-6731 . — PMID 5960258 .  (Hozzáférés dátuma: 2015. február 27.) Archivált másolat (hivatkozás nem elérhető) . Letöltve: 2015. február 27. Az eredetiből archiválva : 2017. október 5.. 
  11. ↑ Ornstein L., Davis BJ Korongelektroforézis. – Rochester, NY , USA: Distillation Products Industries, Eastman Kodak Co. , 1962.  (angol)
  12. ↑ Weber K., Osborn M. A molekulatömeg-meghatározások megbízhatósága dodecil-szulfát-poliakrilamid gélelektroforézissel  (angol)  // The Journal of Biological Chemistry : folyóirat. - Baltimore, MD, USA: American Society for Biochemistry and Molecular Biology, 1969. - Vol. 244. sz. 16 . - P. 4406-4412. — ISSN 0021-9258 . — PMID 5806584 .  (Hozzáférés dátuma: 2015. február 27.) Archivált másolat (hivatkozás nem elérhető) . Letöltve: 2020. október 13. Az eredetiből archiválva : 2020. január 18. 
  13. ↑ Hunter RL, Merkert CL Zónaelektroforézissel elválasztott enzimek hisztokémiai demonstrációja keményítőgélekben // Tudomány. - 1957. - 1. évf. 125. - P. 1294-1295. (Angol)
  14. ↑ Baker CMA Madárfehérjék molekuláris genetikája. IX. A Gallus nemzetség tojásfehérje fehérjéinek interspecifikus és intraspecifikus variációja  (angol)  // Genetika : folyóirat. - Baltimore, MD, USA: Genetics Society of America, 1968. - Vol. 58. sz. 2 . - P. 211-226. — ISSN 0016-6731 . — PMID 5960258 .  (Hozzáférés dátuma: 2015. február 27.) Archivált másolat (hivatkozás nem elérhető) . Letöltve: 2015. február 27. Az eredetiből archiválva : 2017. október 6.. 
  15. ↑ Baker CMA, Croizier G., Stratil A., Manwell C. Csirketojás és szérum néhány fehérjepolimorfizmusának azonosítása és nómenklatúrája  //  Advances in Genetics : Journal. - New York, NY, USA: Academic Press, 1970. - Vol. 15. - P. 147-174. — ISSN 0065-2660 . — PMID 4936422 .  (Hozzáférés dátuma: 2015. február 27.) Archivált másolat (hivatkozás nem elérhető) . Letöltve: 2020. október 13. Az eredetiből archiválva : 2020. október 13. 
  16. ↑ Romanov MN (1988-06-07). „Az ovoproteinek genetikai polimorfizmusának vizsgálata csirkék egyes tojástípusú és hús-tojás típusú vonalaiban” . absztraktok . Fiatal baromfitudósok 4. szimpóziuma. Krakkó , Lengyelország : Baromfitudományi Világszövetség, lengyel fiók. p. 10.OCLC 899128291.  _ _ Letöltve: 2020-10-18 . (Angol)
  17. ↑ Romanov M. N. (1994. 01. 27.). „Ovoprotein lókuszok elektroforetikus vizsgálata tojástyúk-populációkban a Highsex Brown keresztezés kialakulása során” . Tez. jelentés _ I Gyakornok. konf. on Molecular Genetic Markers of Animals, Kijev , 1994. január 27-29. Kijev, Ukrajna : Ukr. akad. mezőgazdasági Tudományok , Állattenyésztési és Genetikai Intézet, Agroökológiai és Biotechnológiai Intézet; mezőgazdasági tudomány. pp. 34-35. OCLC  899128337 . TsNShB , TRN: RU9815007X . Letöltve: 2015-02-28 . Archiválva az eredetiből 2017. október 6-án.
  18. ↑ Romanov M.N.; Chernikov V. F. (1994. 01. 27.). „A polimorf ovomókusok, mint a feketefejű sirályok populáción belüli változékonyságának markerei” . Tez. jelentés _ I Gyakornok. konf. on Molecular Genetic Markers of Animals, Kijev, 1994. január 27-29. Kijev, Ukrajna: Ukr. akad. mezőgazdasági Tudományok, Állattenyésztési és Genetikai Intézet, Agroökológiai és Biotechnológiai Intézet; mezőgazdasági tudomány. pp. 35-36. OCLC  899128260 . Letöltve: 2015-02-28 . Elavult használt paraméter |coauthors=( súgó ) Archiválva az eredetiből: 2020. augusztus 8.
  19. ↑ Komatsu S., Kojima K., Suzuki K., Ozaki K., Higo K. Rice Proteome Database based on two-dimensional polyacrylamide gel electrophoresis: its status in 2003  // Nucleic Acids Research  : Journal  . - Oxford , Egyesült Királyság: Oxford University Press , 2004. - Vol. 32. sz. Adatbázis probléma . - P. D388-D392. — ISSN 0305-1048 . — PMID 14681440 .  (Hozzáférés: 2015. február 28.) Archív másolat (hivatkozás nem elérhető) . Letöltve: 2020. október 13. Az eredetiből archiválva : 2018. június 3. 

Irodalom

Linkek