| torma peroxidáz | |
|---|---|
| Torma-peroxidáz C1 [1] | |
| Jelölés | |
| Szimbólumok | peroxidáz C1A; PRXC1A |
| EKT | 1W4W , Több szerkezet |
| UniProt | P00433 |
| Egyéb adatok | |
| KF kód | 1.11.1.7 |
| Információ a Wikidatában ? | |
A torma-peroxidáz ( HRP ) egy tormából izolált enzim , amelyet széles körben alkalmaznak a molekuláris biológiai technikákban, hogy a gyenge jelet a kimutatáshoz szükséges szintre emeljék. A torma-peroxidáz molekulatömege körülbelül 44173,9 Da, egy glikoprotein , és négy lizin aminosav- maradékot tartalmaz, amelyek a jelölendő molekulához kapcsolódnak.
A torma-peroxidáz aktivitású termék kimutatásra és mennyiségi meghatározására alkalmas szín vagy lumineszcens vegyület. A HRP-t gyakran használják konjugátumok részeként bizonyos molekulák kimutatására. Például Western-blot esetén HRP-konjugátumokat használnak a célfehérjék vagy -molekulák elleni antitestekkel; ebben az esetben az antitest egy adott célpontra specifikus, és a HRP kimutatható jelet képez. [2] . A torma-peroxidázt olyan technikákban is használják, mint az ELISA és immunhisztokémiai elemzés.
A torma-peroxidáz ideális enzim számos alkalmazáshoz, mivel viszonylag kicsi, viszonylag stabil és olcsóbb, mint az olyan alternatívák, mint az alkalikus foszfatáz . A HRP egységnyi idő alatt nagyobb fordulatszámmal rendelkezik, így viszonylag rövid idő alatt biztosítja a kellően erős jel kialakulását .
Az utóbbi években a neuronok torma-peroxidázzal történő jelölésének technikája az egyik fő kutatási eszközzé vált. Rövid időn belül több idegtudós használta a torma-peroxidázt, mint a Golgi-festési módszert 1870 óta. [3]D. Purves és JW Lichtman, Principles of Neural Development.
A torma-peroxidáz szabad formában vagy más molekulákkal konjugátum formájában szubsztrát jelenlétét igényli a képalkotáshoz. A HRP hidrogén-peroxid jelenlétében oxidálja a szubsztrátot, spektrofotometriásan detektálható termékeket hozva létre . [négy]
A kereskedelemben kapható torma-peroxidáz szubsztrátok, a 3,3',5,5'- Tetrametilbenzidin ( TMB ) és a 3,3' - Diaminobenzidin ( DAB ) színes termékeket adnak az oxidáció során, míg a SuperSignal és ECL . kemilumineszcens
A torma peroxidáz katalizálja a luminol 3 -aminoftaláttá történő oxidációját egy sor intermedieren keresztül . Ezt a reakciót alacsony intenzitású, 428 nm hullámhosszú izzás kíséri. Bizonyos anyagok jelenlétében a lumineszcencia akár ezerszeresére is növelhető. A lumineszcencia fokozásának jelenségét fokozott kemilumineszcenciának ( ECL ) nevezik . A leghatékonyabb fokozók a fenolszármazékok, például a p-jódfenol. Az ECL körülbelül 0,5 pikogramm nukleinsav kimutatását teszi lehetővé Southern bloton .