Barr test

A Barr-test (X-ivar kromatin)  egy sűrű ( heterokromatikus ) szerkezetbe hajtogatott inaktív X-kromoszóma , amely nőstény méhlepényes emlősök – köztük az ember – szomatikus sejtjeinek interfázisú magjaiban figyelhető meg . Alapfestékekkel jól fest [ 1] .

A genomban található két X-kromoszóma bármelyike ​​inaktiválható az embrionális fejlődés kezdetén ; a választás véletlenszerűen történik. Kivételt képeznek az egérben a csírahártyák sejtjei , amelyek szintén az embrió szövetéből képződnek, amelyekben csak az apai X kromoszóma inaktiválódik [2] .

Így egy olyan nőstény emlősben, amely heterozigóta az X-kromoszóma génje által meghatározott bármely tulajdonságra, ennek a génnek különböző alléljei különböző sejtekben működnek ( mozaikizmus ). Az ilyen mozaikosság klasszikus jól látható példája a teknősmacskák elszíneződése -  a sejtek felében a "piros" X kromoszóma aktív, a másik felében pedig a gén "fekete" allélja, amely részt vesz a sejtek kialakulásában. melanin . A teknőshéjú macskák rendkívül ritkák, és két X-kromoszómájuk van ( aneuploidia ) [3] .

Az aneuploidiában szenvedő emberekben és állatokban, amelyek genomjában 3 vagy több X-kromoszóma van (lásd például Klinefelter -szindrómát ), a Barr-testek száma egy szomatikus sejt magjában eggyel kevesebb, mint az X-kromoszómák száma. azaz mindig csak 1 marad aktív X-kromoszóma, függetlenül attól, hogy hányan vannak).

Használat

A szexkromatin elemzést a következőkre használják:

1. A neméhez tartozó egyed sejtjei elemzése, ha az nem áll rendelkezésre kutatásra (a magzat nemének prenatális diagnózisa, igazságügyi orvosszakértői vizsgálat stb.).
2. A nem azonosítása, ha nem egyértelmű (pl. valódi vagy hamis hermafroditizmus meghatározásakor).
3. A fenotípus és a szervezet genotípusának megfelelőségének ellenőrzése (például nők sportversenyeken történő vizsgálatakor).
4. A magzat nemének meghatározása méhen belül, ha fennáll a nemhez kötött betegség gyanúja (pl. hemofília, izomdystrophia egyes formái, stb.), a halálos beteg gyermek születésének megelőzése érdekében.
5. A nemi kromoszómák számában vagy szerkezetében fellépő eltérések előzetes diagnosztizálására használják, ha az alany szexuális fejlődésében megsérti.

Előrelépés a szexkromatin kinyerésében az elemzéshez

1. Sejtanyag megszerzése. Források - különféle szövetek, de előnyösek azok, amelyeket nem kell in vitro (in vitro) tenyészteni.
2. Az X-kromatin felnőtteknél történő meghatározására leggyakrabban a szájnyálkahártyáról , ritkábban a hüvely nyálkahártyájáról, valamint a szőrtüszők sejtjeiből származó keneteket használnak. A perinatális diagnózist magzatvíz segítségével végzik.
3. Az Y-kromatin számának meghatározásához a fenti szöveteket, valamint a spermiumokat, valamint a tenyésztett limfocitákat használják.
4. Általában az egyrétegű sejttenyészetek, általában a fibroblasztok, ideálisak az X-kromatin és az Y-kromatin elemzésére.
5. A készítmények rögzítése metanol oldattal vagy etanol és ecetsav (3:1) keverékével vagy önmagában etanollal.
6. Dehidratálás a gyógyszer egyik oldatból a másikba történő átvitelével (CSAK Barr-testek elemzéséhez), mindegyik oldattal 5 percig: alkoholban 70 °, alkoholban 50 °, desztillált vízben I, desztillált vízben II.
7. Hidrolízis (CSAK a Barr-test elemzéséhez) HCl-ben (opcionális).
8. Nemi kromatin festés. Az X- és Y-kromatin festési módszerei eltérőek. Az első típusú kromatint nem fluoreszcens színezékeken alapuló készítményekkel festik meg: bázikus fukszin, tionin, acetoorcein, toluidin kék stb. A második típust fluorokrómokkal - az akridinnarancs származékaival - festik: kinin, kinakrin mustár, kinakrin-propil. A készítményeket a festékben 30 perctől 12 óráig érlelik.

Az X-kromatin készítményeket megszárítják és áteresztő fénybe merítéssel vizsgálják. Az Y-kromatin készítményeket speciális pufferoldatba zárják, és ultraibolya fényben lumineszcens mikroszkóppal vizsgálják.

Elemzés

A vizsgálatot szétválasztott, elterjedt sejteken végezzük. A nemi kromatin meghatározására szolgáló szövetmetszeteket csak akkor használják, ha nem lehet kenetet vagy preparátumot-lenyomatot kapni egy szervmetszetről.

1. Mikroszkópia.
2. Az eredmények értelmezése [4] .

Források

1. ↑ Biológiai enciklopédikus szótár. M., "Szovjet Enciklopédia", 1986.
2. Gének és genomok. M., "Mir", 1998. T. 2, S. 146.
3. ↑ Mozaicizmus, teknősbékahéjú macskák és genetikailag lehetetlen cicák Archiválva : 2009. október 21. a Wayback Machine -nél .
4. ↑ Nagy Orvosi Enciklopédia / Szerk. A.N. Bakulev: 35 kötetben - M .: Medgiz, 1956. -1964. – 1151 p.