Nicking enzim által közvetített amplifikáció

A Nicking Enzim-amplifikációs reakció ( NEAR ) a polimeráz láncreakcióhoz ( PCR) hasonló in vitro DNS-amplifikációs módszer .  A DNS-replikáció állandó hőmérsékleten megy végbe, polimeráz (és egy nicking enzim ) segítségével a DNS exponenciális amplifikációja 55 °C és 59 °C közötti hőmérséklet-tartományban.

A NEAR potenciális előnyei a PCR-rel szemben a megnövekedett sebesség és az alacsonyabb energiaköltségek, amelyek jellemzők más izoterm amplifikációs sémákkal [2] . A NEAR fő hátránya a PCR-hez képest a nem specifikus amplifikációs termékek képződése, ami gyakori probléma az izoterm amplifikációs reakciókban [3] .

A NEAR-reakció a természetben előforduló endonukleázokat vagy mesterségesen előállított endonukleázokat használ, amelyek csak az egyik szálon vezetnek száltörést a kettős szálú DNS hasítási helyén. Ezen enzimek némelyikének azon képességét, hogy katalizálják az izoterm DNS-amplifikációt, feltárták, de magukra az enzimekre vonatkozó szabadalmakban nem igényelték [4] [5] .

A nicking enzim által közvetített amplifikációt bioszenzorok létrehozására használják [6] [7] .

Lásd még

Jegyzetek

  1. ↑ Tyumentsev A.I., Tyumentseva M.A., Akimkin V.G. CRISPR-Cas rendszer a John Cunningham vírus (JCPyV) DNS kimutatására ultraalacsony koncentrációban. Szabadalom egy találmányra . - M. : Szellemi Tulajdon Szövetségi Szolgálata, 2021. - 21 p.
  2. ↑ Zanoli L., Spoto G. Izotermikus amplifikációs módszerek nukleinsavak kimutatására mikrofluidikus eszközökben   // Bioszenzorok . - 2012. - Kt. 3 , iss. 1 . — P. 18–43 . — ISSN 2079-6374 . - doi : 10.3390/bios3010018 . Archiválva az eredetiből 2022. február 12-én.
  3. ↑ Eric Tan, Barbara Erwin, Shale Dames, Tanya Ferguson, Megan Buechel. Specifikus versus nem specifikus izoterm DNS-amplifikáció termofil polimerázon és nikkelező enzimaktivitásokon keresztül   // Biokémia . - 2008. - Vol. 47 , iss. 38 . — P. 9987–9999 . — ISSN 1520-4995 0006-2960, 1520-4995 . doi : 10.1021 / bi800746p . Archiválva az eredetiből 2022. február 12-én.
  4. ↑ 6,191,267 számú amerikai egyesült államokbeli szabadalom. 2001. február 20.
  5. ↑ US 6,660,475 számú szabadalom. 2003. december 9
  6. ↑ Jingguo Xu, Jia Guo, Sarah Wanjiku Maina, Yumeng Yang, Yimin Hu. A Staphylococcus aureus aptaszenzora, amely nickingenzim-amplifikációs reakción és gördülőkör-amplifikáción alapul  //  Analytical Biochemistry. - 2018. - Kt. 549 . — P. 136–142 . - doi : 10.1016/j.ab.2018.03.013 .
  7. ↑ Ruo-Nan Zhao, Li-Ping Jia, Zhe Feng, Rong-Na Ma, Wei Zhang. Ultraérzékeny elektrokemilumineszcens aptaszenzor a 8-hidroxi-2'-dezoxiguanozin detektálásához, a cél által kiváltott több-DNS-felszabadulás és a nickingenzim-amplifikációs stratégia alapján  //  Bioszenzorok és bioelektronika. - 2019. - 1. évf. 144 . — P. 111669 . - doi : 10.1016/j.bios.2019.111669 .