DNS vonalkódolás

A DNS vonalkódolás (DNA barcoding, genetic barcoding, DNA barcoding, eng.  DNA barcoding ) egy olyan molekuláris azonosítási módszer, amely lehetővé teszi a DNS-ben található rövid genetikai markerek segítségével annak meghatározását, hogy egy szervezet egy adott taxonhoz tartozik-e [1] . A molekuláris filogenetika módszereitől eltérően a DNS vonalkódolás az adott szervezet helyének meghatározására szolgál egy már létező osztályozásban , nem pedig filogenetikai fák építésére és egy meglévő osztályozás kiegészítésére [2] , így felmerül a DNS vonalkódok azonosításának kérdése. egy új szervezet faja ellentmondásos [3] . Az állatok genetikai vonalkódolására leggyakrabban használt lókusz a mitokondriális citokróm oxidáz I gén körülbelül 600 bp régiója .

A DNS vonalkódolás alkalmazása olyan feladatokra terjed ki, mint például a növény azonosítása csak a levelei alapján (például ha nincs virág vagy gyümölcs ), rovarlárvák azonosítása (amelyek kevesebb diagnosztikai tulajdonsággal rendelkeznek, mint a felnőttek , és gyakran kevésbé tanulmányozott), az állatok étrendjének meghatározása a gyomor vagy az ürülék tartalma alapján , és több [2] [4] .

Lokusz kiválasztása

A DNS vonalkódolási lókuszoknak:

• a DNS nem túl hosszú szakaszait képviselik ;
• jelen kell lennie a szóban forgó taxonok legtöbb képviselőjében, és ugyanakkor kisszámú eltérést tartalmazhat ugyanazon faj képviselőiben [5] ;
• meglehetősen könnyű szekvenálni a modern szekvenálási technológiák segítségével specifikus primerek használata nélkül [6] [7] .

Különféle lókuszokat javasolnak a különböző taxonokhoz, az ilyen lókuszok kiválasztását speciális bizottságok végzik. Jelenleg hivatalosan használt:

• Állatok és sok más eukarióta  esetében a mitokondriális citokróm-oxidáz gén ;
• Növényeknél az rbcL és a matK kloroplaszt gének összefűzése (azonban ezek a lókuszok alacsony felbontást biztosítanak a szárazföldi növények azonosításához [8] , ezért próbálnak pótlást találni [9] );
• A gombák esetében ez  egy belső átírt távtartó (ITS) [10] .

Mitokondriális DNS

A mitokondriális DNS (mtDNS) szekvenciák több okból is felkeltik az emberek figyelmét a DNS vonalkódolás célpontjaként :

• Gyakorlatilag minden eukarióta sejt tartalmaz mitokondriumokat, amelyek a mitokondriális genomot hordozzák . Kivételt képez számos egysejtű parazita forma, mint például a Trachipleistophora , Entamoeba , Giardia , amelyekben a mitokondriumok másodlagos lebomlása következett be. Ennek ellenére ezeknek az élőlényeknek a sejtjeiben találhatók kezdetleges organellumok , amelyek az egykor működő mitokondriumok maradványai [11] [12] .
• Az állatok mitokondriális DNS-ét a mutációk viszonylag nagy arányú felhalmozódása jellemzi , ami a mitokondriális gének szekvenciájában a populációk között és a populációkon belüli, viszonylag rövid ( evolúciós értelemben vett) időn belüli különbségek kialakulásához vezet . generációk ezrei.
• A mitokondriumok anyai öröklődésűek , így az effektív populáció nagysága ebben az esetben arányos a szaporodó nőstények számával, míg a nukleáris genom esetében ez a szám kétszerese a populáció összes szaporodó egyedének (mivel minden egyed a sejtmag két példányát tartalmazza genom). A csökkent effektív populációméret az mtDNS génvonalak gyorsabb szelekciójához vezet a populációkon belül és a populációk között, az egyes egyedek termékenységében mutatkozó különbségek miatt ( az összeolvadás elve ).

A mutációk gyors felhalmozódása és a gyors szelekció kombinációja azt eredményezi, hogy a mitokondriális DNS-szekvenciák egy fajon belül viszonylag gyengén, a fajok között pedig viszonylag erősen különböznek, ami a hatékony vonalkódoláshoz szükséges. A vonalkódolásra leggyakrabban használt mtDNS lókusz a mitokondriális citokróm c oxidáz (COI) I. alegység génjének 658 bp régiója (az úgynevezett Folmer régió) [1] .

Az mtDNS-szekvenciák különbségei nem lehet objektív mércéje az organizmusok azonos vagy különböző fajokhoz való tartozásának számos olyan helyzetben, amely a fajon belüli szekvenciadiverzitás növekedéséhez vezet:

• Rekombinációs aktusok jelenléte esetén (közvetlen mtDNS-rekombinációt számos kéthéjú kagyló esetében kimutattak , például a Mytilus nemzetségnél [13] );
• Hibridizáció esetén ( a Lepus nemzetségbe tartozó nyulaknál látható ) [14] ;
• Ha a fajon belül több mtDNS-vonal is kiemelkedik ugyanazon populáción belül;
• A hímeket szelektíven elpusztító endoszimbionták jelenlétében [15] ;
• Intracelluláris szimbionták jelenlétében, ami a citoplazma inkompatibilitásához vezet a megtermékenyítés során , ami nagyon jellemző például a rovarokra (úgy véljük, hogy az összes rovarfaj 15-75%-a fertőzött a Wolbachia nemzetségbe tartozó baktériumokkal ) . 16] [17] .

Hely kiválasztása szárazföldi növények vonalkódolásához

Számos kutató [2] úgy véli, hogy a COI lókusz használata a legtöbb faj azonosítására növényekben nem alkalmazható, mivel a citokróm c oxidáz gén evolúciós sebessége magasabbrendű növényekben sokkal alacsonyabb, mint az állatokban. Számos tanulmányt végeztek annak érdekében, hogy megfelelőbb lókuszt találjanak a DNS vonalkódolására a zárvatermők genomjában , amelyek a magasabbrendű (szárazföldi) növények legnagyobb csoportja. Jelöltek a trnH és psbA gének közötti plasztid spacer sejtmag belső átírt távtartó (ITS) szekvenciái [2] , valamint a kloroplasztiszokban az intronillesztő enzimet kódoló matK plasztid gén . [7] , javasolták .

2009-ben a növényi DNS vonalkódolásával foglalkozó szakemberek nagy csoportja javasolta az rbcL és a matK kombinációjának alkalmazását, amely  két gén a kloroplasztisz genomjában van kódolva [6] . A fajok jobb felbontása érdekében javasolt az ITS2 nukleáris spacer hozzáadása ezekhez a lókuszokhoz [18] . 2015-től folytatódik a megfelelő lókuszok keresése, különösen az ycf1 kloroplaszt génlókuszt , mint ígéretes jelöltet a vonalkódos növényazonosításra [8] .

A

A madarak meghatározása

Paul Gebert és munkatársai 260 madárfajt (az észak-amerikai költőfajok több mint egyharmadát) vonalkóddal próbálták megtalálni a hagyományos taxonómiával meghatározott fajhatárok és a DNS-vonalkóddal azonosítottak között . Ennek eredményeként kiderült, hogy az összes COI génszekvencia különbözött a fajok között, míg a fajon belül (130 fajt kettő vagy több minta képviselt) a COI szekvenciában nem, vagy jelentéktelen különbségek voltak. A szekvenciák fajok között átlagosan 7,93%-kal, fajokon belül pedig 0,43%-kal tértek el [19] .

Négy esetben szokatlanul nagy különbséget figyeltek meg a fajon belül a lókuszok sorrendje között, ami okot adott új fajok jelenlétének feltételezésére. Érdekes módon négy esetből háromban egyes taxonómusok már kettéosztottak egy ilyen politípusos fajt. Gebert és munkatársai adatai alátámasztják ezt az elkülönítést, és általánosságban is bizonyítják a DNS vonalkódolás alkalmazásának hatékonyságát madárfajok meghatározására. Ezen túlmenően a szerzők egy univerzális küszöböt javasoltak, amelyet új fajok azonosításakor javasolnak: különböző fajoknak javasolják azokat az egyedcsoportokat tekinteni, amelyek vonalkódoló lókuszainak szekvenciái közötti átlagos különbség tízszer nagyobb, mint a átlagos intraspecifikus különbség a vizsgált csoportban [19] .

A madarak taxonómiájában a DNS vonalkódolás alkalmazásának további példája lehet a széles skálájú és nagy fajokon belüli morfológiai variabilitású fajok vizsgálata, amely a macskabagoly [20] példáján történt , valamint a csoportok átszervezése. tisztázatlan belső kapcsolatokkal, mint például a Thymeliaceae család [21] .

A hal meghatározása

A Fish Barcode of Life Initiative (FISH-BOL) [22] egy olyan projekt, amely a taxonómiailag érvényesnek minősített halminták DNS -vonalkód adatait gyűjti, szabványosítja és rendszerezi. A 2005-ben elindított adatbázis 2016-tól kezdve több mint 11 000 halfaj locusszekvenciájára vonatkozó információkat tartalmaz, amelyek a csoport teljes biológiai sokféleségének körülbelül 35%-át teszik ki . A FISH-BOL a szekvenciákon kívül a vizsgált példányok fényképeit és földrajzi koordinátáit, a fajok elterjedésére vonatkozó információkat, a nómenklatúrát és a szakirodalmi hivatkozásokat tartalmazza. Így a FISH-BOL megkettőzi és nagymértékben kiegészíti az egyéb forrásokból, például a Catalog of Fishes és a FishBase -ből elérhető információkat .

Az összes halfaj DNS-vonalkódolása számos okból hasznos lehet: lehetővé teszi a fajok azonosítását az emberek széles köre számára, a korábban ismeretlen fajok azonosítását, valamint a fajok azonosítását olyan helyzetekben, ahol a hagyományos módszerek nem alkalmazhatók. Példa erre a szituációra a csoportosítók vonalkódolást alkalmazó filogenetikai analízise, ​​amely segítségével meghatározható a táplálékmaradványokból a szivarkórt okozó halfaj [23] .

Rejtett nézetek

Az egyik feladat, amelyben a DNS vonalkódolásnak nagy szerepe lehet, az úgynevezett rejtélyes vagy rejtett fajok közötti határok meghatározása. Általában morfológiailag megkülönböztethetetlen fajok komplexumáról van szó, az ilyen komplexumok külön taxonokra bontása gyakran nehéz.

A DNS vonalkódolását többször is alkalmazták a Costa Rica északnyugati részén található Guanacaste rezervátum rejtélyes fajainak tanulmányozása során [24] [25] [26] [27] [28] .

Az egyik első látens faj, amely kimutatta a DNS vonalkódolás hatékonyságát az elválasztás során, a neotróp zsírfejű lepkék , az Astraptes fulgerator [ volt . Ez olyan fajok komplexuma, amelyek implicit morfológiai különbségekkel és hernyóikban szokatlanul sokféle tápláléknövényrel rendelkeznek. Az A. fulgeratorral morfológiailag rokon 484 organizmus COI-gén-szekvenálási eredményeinek elemzése vitákat váltott ki: 2004-ben a szerzők azt javasolták, hogy az A. fulgerator legalább 10 fajból áll [24] ; 2006-ban ugyanazokat a szekvenciákat újra elemezték bootstrap szomszéd csatlakozással , populáció aggregációs elemzéssel [29] és kladisztikus haplotípus elemzéssel , 3 (maximum 7) kládra való felosztást kaptak, és a korábbi munkákat kritizálták [25] . Az ilyen különbségek azt mutatták, hogy a DNS vonalkódolással kapott eredmények értelmezése az analitikai módszerek megválasztásától függ, és a látens fajok DNS-vonalkódok segítségével történő megkülönböztetése ugyanolyan szubjektív lehet, mint a taxonómia más formái.

A Guanacaste rezervátumból származó fajok további példái, amelyek a DNS vonalkódolási módszer hatékonyságát bizonyították, a trópusi hernyók tanulmányozása és azonosítása [26] , valamint a hernyókból kinőtt parazita Belvosia [ ( Tachinidae ) legyek taxonizálása [27 ] ] [28] .

A Protocalliphora nemzetségbe tartozó egy másik rokon légycsalád, a Calliphoridae azonban nem tudta elválasztani a DNS-t vonalkóddal: megvizsgálták a Protocalliphora nemzetségbe tartozó legyek , amelyekről ismert, hogy fertőzöttek a Wolbachia endoszimbiotikus baktériummal fertőzött, vonalkódolás hatékonyságát. . A taxonokra való felosztás a fajok 60%-ánál nem volt lehetséges, új fajok azonosításakor pedig 75%-os hiba volt a nemzetség fajszámának becslésében. Feltételezhető, hogy ez az eredmény a fajok mitokondriális szintű monofiletikusságának hiányára vezethető vissza (például egy esetben 4 különböző fajnak ugyanaz a vonalkódja volt), az intraspecifikus monofília hiánya pedig a Wolbachia fertőzéssel összefüggő interspecifikus hibridizációnak köszönhető . A Wolbachia a rovarfajok 15-75%-ának endoszimbionta, így a mitokondriális szekvencián alapuló fajszintű azonosítás sok rovar esetében nem lehetséges [16] .

A fosszilis szervezetek osztályozása

A DNS-vonalkódolás lehetőségét a Föld élővilágának történelmi sokféleségének felmérésére a kihalt laposmellű futómadarak egy csoportja, a moa példájával értékelték . A szubfosszilis moa csontokból származó citokróm-oxidáz gén vonalkódolásával azonosított 10 moa faj megfelelt a korábban ismert fajoknak, egy kivétellel, amely egy korábban azonosítatlan fajcsoportot képviselhet. 2,7%-os standard küszöbértéket alkalmazva ugyanazon az adatokon 6 fajt találtunk, azonban a moák lassú növekedési és szaporodási üteme miatt fennáll annak a lehetősége, hogy a fajokon belüli variáció meglehetősen alacsony, aminek következtében a szerzők 1 ,24%-os küszöb. Másrészt nincs olyan meghatározott küszöbérték, amelynél azt lehetne tekinteni, hogy a populációk visszafordíthatatlanul megkezdték a fajképződési folyamatot [30] .

Kritika

A DNS vonalkódolása vegyes reakciókat váltott ki a tudósok, különösen a taxonómusok részéről, a lelkes jóváhagyástól a hangos ellenállásig [31] [32] .

Felmerült, hogy egyes közelmúltban eltérő fajok nem különböztethetők meg a COI génszekvenciák alapján [33] . Ezenkívül az állatfajok körülbelül 23%-a polifiletikus , feltételezve, hogy mtDNS-adataik pontosak [34] , vagyis ha egy fajt egy állathoz mtDNS vonalkóddal rendelnek, az esetek körülbelül 23%-ában félreérthető vagy pontatlan eredményt ad [35] . ] .

A rovaros vizsgálatok során egyenlő vagy még nagyobb hibaarány fordulhat elő, ami a mitokondriális és a nukleáris genomok közötti korreláció gyakori hiánya vagy a vizsgált gének fajokon belüli és fajok közötti távolsága közötti különbség hiánya miatt következhet be [36] [16]. [37] . A rovarok körében is gyakoriak a citoplazmatikus inkompatibilitást kiváltó szimbionták (pl . Wolbachia ) vagy a hímpusztító mikroorganizmusok által okozott mtDNS-problémák. Figyelembe véve, hogy a rovarok az összes ismert élőlény több mint 75%-át teszik ki [38] , látható, hogy bár az mtDNS vonalkódolás működhet a gerinceseknél , előfordulhat, hogy a legtöbb ismert szervezetnél nem hatékony.

Manapság úgy gondolják, hogy a DNS vonalkódolását a hagyományos taxonómiai eszközök és a molekuláris taxonómia alternatív formái mellett kell használni a problémás esetek azonosítására és a hibák észlelésére. A nem titkos fajokkal kapcsolatos helyzetek általában egyértelműen megoldhatók hagyományos vagy molekuláris taxonómiával. Bonyolultabb esetekben azonban csak a megközelítések kombinációja ad eredményt. Végül, mivel a globális biodiverzitás nagy része ismeretlen, a molekuláris vonalkódok csak utalhatnak új taxonok létezésére, de nem izolálhatják vagy leírhatják azokat [39] .

Lásd még

• Molekuláris filogenetika
• Genetikai ujjlenyomat
• Mitokondriális DNS
• Citokróm c oxidáz

Jegyzetek

1. ↑ 1 2 Hebert PD , Cywinska A. , Ball SL , deWaard JR. Biológiai azonosítás DNS vonalkódokkal.  (angol)  // Proceedings. Biológiai tudományok / The Royal Society. - 2003. - 1. évf. 270, sz. 1512 . - P. 313-321. - doi : 10.1098/rspb.2002.2218 . — PMID 12614582 .
2. ↑ 1 2 3 4 Kress WJ , Wurdack KJ , Zimmer EA , Weigt LA , Janzen DH DNS-vonalkódok használata a virágzó növények azonosítására.  (angol)  // Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. - 2005. - 20. évf. 102. sz. 23 . - P. 8369-8374. - doi : 10.1073/pnas.0503123102 . — PMID 15928076 .
3. ↑ Seberg O. , Petersen G. Hány lókusz szükséges egy krókusz DNS vonalkódolásához?  (angol)  // Public Library of Science ONE. - 2009. - Vol. 4, sz. 2 . - P. e4598. - doi : 10.1371/journal.pone.0004598 . — PMID 19240801 .
4. ↑ Soininen EM , Valentini A. , Coissac E. , Miquel C. , Gielly L. , Brochmann C. , Brysting AK , Sønstebø JH , Ims RA , Yoccoz NG , Taberlet P. Kisméretű növényevők étrendjének elemzése: a DNS barcoding hatékonysága nagy áteresztőképességű piroszekvenálással párosulva komplex növénykeverékek összetételének megfejtésére.  (angol)  // Határok a zoológiában. - 2009. - Vol. 6. - P. 16. - doi : 10.1186/1742-9994-6-16 . — PMID 19695081 .
5. ↑ Lahaye R. , van der Bank M. , Bogarin D. , Warner J. , Pupulin F. , Gigot G. , Maurin O. , Duthoit S. , Barraclough TG , Savolainen V. A biodiverzitás hotspotjainak flóráit vonalkódoló DNS.  (angol)  // Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. - 2008. - Vol. 105, sz. 8 . - P. 2923-2928. - doi : 10.1073/pnas.0709936105 . — PMID 18258745 .
6. ↑ 1 2 DNS vonalkód szárazföldi növényekhez.  (angol)  // Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. - 2009. - Vol. 106. sz. 31 . - P. 12794-12797. - doi : 10.1073/pnas.0905845106 . — PMID 19666622 .
7. ↑ 1 2 Kress WJ , Erickson DL DNS vonalkódok: gének, genomika és bioinformatika.  (angol)  // Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. - 2008. - Vol. 105, sz. 8 . - P. 2761-2762. - doi : 10.1073/pnas.0800476105 . — PMID 18287050 .
8. ↑ 1 2 Dong W. , Xu C. , Li C. , Sun J. , Zuo Y. , Shi S. , Cheng T. , Guo J. , Zhou S. ycf1, a szárazföldi növények legígéretesebb plasztid DNS-vonalkódja.  (angol)  // Tudományos jelentések. - 2015. - Kt. 5. - P. 8348. - doi : 10.1038/srep08348 . — PMID 25672218 .
9. ↑ Li DZ , Gao LM , Li HT , Wang H. , Ge XJ , Liu JQ , Chen ZD , Zhou SL , Chen SL , Yang JB , Fu CX , Zeng CX , Yan HF , Zhu YJ , Sun YS , Chen SY , Zhao L. , Wang K. , Yang T. , Duan GW Egy nagy adatkészlet összehasonlító elemzése azt jelzi, hogy a magnövények vonalkódjába belső átírt távtartót (ITS) kell beépíteni.  (angol)  // Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. - 2011. - 20. évf. 108. sz. 49 . - P. 19641-19646. - doi : 10.1073/pnas.1104551108 . — PMID 22100737 .
10. ↑ Schoch CL , Seifert KA , Huhndorf S. , Robert V. , Spouge JL , Levesque CA , Chen W. Nuclear ribosomal internal transcribed spacer (ITS) régió, mint univerzális DNS vonalkód marker a gombák számára.  (angol)  // Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. - 2012. - Kt. 109. sz. 16 . - P. 6241-6246. - doi : 10.1073/pnas.1117018109 . — PMID 22454494 .
11. ↑ Chan KW , Slotboom DJ , Cox S. , Embley TM , Fabre O. , van der Giezen M. , Harding M. , Horner DS , Kunji ER , León-Avila G. , Tovar J. Egy újszerű ADP/ATP transzporter in az Entamoeba histolytica mikroaerofil emberi parazita mitoszómája.  (angol)  // Jelenlegi biológia : CB. - 2005. - 20. évf. 15, sz. 8 . - P. 737-742. - doi : 10.1016/j.cub.2005.02.068 . — PMID 15854906 .
12. ↑ Williams BA , Hirt RP , Lucocq JM , Embley TM Mitokondriális maradvány a mikrosporid Trachipleistophora hominisben.  (angol)  // Természet. - 2002. - 20. évf. 418. sz. 6900 . - P. 865-869. - doi : 10.1038/nature00949 . — PMID 12192407 .
13. ↑ Ladoukakis ED , Zouros E. Közvetlen bizonyíték homológ rekombinációra kagyló (Mytilus galloprovincialis) mitokondriális DNS-ben.  (angol)  // Molekuláris biológia és evolúció. - 2001. - 20. évf. 18, sz. 7 . - P. 1168-1175. — PMID 11420358 .
14. ↑ Melo-Ferreira J. , Boursot P. , Suchentrunk F. , Ferrand N. , Alves PC Invázió a hideg múltból: hegyi nyúl (Lepus timidus) mitokondriális DNS kiterjedt introgressziója három másik nyúlfajba Észak-Ibériában.  (angol)  // Molekuláris ökológia. - 2005. - 20. évf. 14. sz. 8 . - P. 2459-2464. - doi : 10.1111/j.1365-294X.2005.02599.x . — PMID 15969727 .
15. ↑ Rufus A. Johnstone, Gregory D. D. Hurst. Az anyától örökölt hímgyilkos mikroorganizmusok megzavarhatják a mitokondriális DNS-variabilitás értelmezését  //  Biological Journal of the Linnean Society. - 1996-08-01. — Vol. 58 , iss. 4 . - P. 453-470 . — ISSN 1095-8312 . - doi : 10.1111/j.1095-8312.1996.tb01446.x . Az eredetiből archiválva : 2016. június 1.
16. ↑ 1 2 3 Whitworth TL , Dawson RD , Magalon H. , Baudry E. A DNS-vonalkódolás nem tudja megbízhatóan azonosítani a Protocalliphora (Diptera: Calliphoridae) blowfly nemzetség fajait.  (angol)  // Proceedings. Biológiai tudományok / The Royal Society. - 2007. - Vol. 274. sz. 1619 . - P. 1731-1739. - doi : 10.1098/rspb.2007.0062 . — PMID 17472911 .
17. ↑ Perlman SJ , Kelly SE , Hunter MS A citoplazmatikus inkompatibilitás populációs biológiája: Cardinium szimbionták fenntartása és terjedése parazita darázsban.  (angol)  // Genetika. - 2008. - Vol. 178. sz. 2 . - P. 1003-1011. - doi : 10.1534/genetics.107.083071 . — PMID 18245338 .
18. ↑ Chen S. , Yao H. , Han J. , Liu C. , Song J. , Shi L. , Zhu Y. , Ma X. , Gao T. , Pang X. , Luo K. , Li Y. , Li X. , Jia X. , Lin Y. , Leon C. Az ITS2 régió validálása új DNS-vonalkódként gyógynövényfajok azonosítására.  (angol)  // Public Library of Science ONE. - 2010. - 20. évf. 5, sz. 1 . - P. e8613. - doi : 10.1371/journal.pone.0008613 . — PMID 20062805 .
19. ↑ 1 2 Hebert PD , Stoeckle MY , Zemlak TS , Francis CM Madarak azonosítása DNS vonalkódokon keresztül.  (angol)  // Public Library of Science Biology. - 2004. - 20. évf. 2, sz. 10 . - P. e312. - doi : 10.1371/journal.pbio.0020312 . — PMID 15455034 .
20. ↑ Nijman V. , Aliabadian M. A DNS vonalkódolás mint eszköz a fajok elhatárolásának tisztázására széles körű fajokban, amint azt baglyok (Tytonidae és Strigidae) szemléltetik.  (angol)  // Állattan. - 2013. - Kt. 30, sz. 11 . - P. 1005-1009. - doi : 10.2108/zsj.30.1005 . — PMID 24199866 .
21. ↑ Huang ZH , Ke DH DNS vonalkódolás és filogenetikai kapcsolatok a Timaliidae-ben.  (angol)  // Genetika és molekuláris kutatás : GMR. - 2015. - Kt. 14. sz. 2 . - P. 5943-5949. - doi : 10.4238/2015.június.1.11 . — PMID 26125793 .
22. ↑ Ward RD , Hanner R. , Hebert PD Az összes hal DNS vonalkódolásának kampánya, FISH-BOL.  (angol)  // Fish Biology folyóirat. - 2009. - Vol. 74. sz. 2 . - P. 329-356. doi : 10.1111/ j.1095-8649.2008.02080.x . — PMID 20735564 .
23. ↑ Schoelinck C. , Hinsinger DD , Dettaï A. , Cruaud C. , Justine JL . Csomófüvesek filogenetikai re-analízise ciguatera halmérgezési alkalmazásokkal.  (angol)  // Public Library of Science ONE. - 2014. - Kt. 9, sz. 8 . — P. e98198. - doi : 10.1371/journal.pone.0098198 . — PMID 25093850 .
24. ↑ 1 2 Hebert PD , Penton EH , Burns JM , Janzen DH , Hallwachs W. Tíz faj egyben: A DNS vonalkódolása rejtélyes fajokat tár fel az Astraptes fulgerator neotróp kapitánylepkében.  (angol)  // Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. - 2004. - 20. évf. 101, sz. 41 . - P. 14812-14817. - doi : 10.1073/pnas.0406166101 . — PMID 15465915 .
25. ↑ 1 2 Andrew VZ Brower. Problémák a DNS vonalkódokkal a fajok meghatározásához: Az Astraptes fulgerator „tíz faja” újraértékelve (Lepidoptera: Hesperiidae)  // Rendszertan és biodiverzitás. - 2006-06-01. - T. 4 , sz. 2 . – S. 127–132 . — ISSN 1477-2000 . - doi : 10.1017/S147720000500191X .
26. ↑ 1 2 ACG hernyó (Lepidoptera) tenyésztési adatbázisok adatbázisának honlapja (downlink) . janzen.sas.upenn.edu. Letöltve: 2016. április 28. Az eredetiből archiválva : 2019. november 2. (határozatlan) 
27. ↑ 1 2 Smith MA , Woodley NE , Janzen DH , Hallwachs W. , Hebert PD DNS vonalkódok rejtélyes gazdaspecifikusságot mutatnak ki a parazitoid legyek (Diptera: Tachinidae) nemzetség feltételezett polifág tagjain belül.  (angol)  // Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. - 2006. - Vol. 103. sz. 10 . - P. 3657-3662. - doi : 10.1073/pnas.0511318103 . — PMID 16505365 .
28. ↑ 1 2 Smith MA , Wood DM , Janzen DH , Hallwachs W. , Hebert PD DNS vonalkódok megerősítik, hogy a látszólag generalista trópusi parazitoid legyek 16 faja (Diptera, Tachinidae) nem mind általános.  (angol)  // Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. - 2007. - Vol. 104. sz. 12 . - P. 4967-4972. - doi : 10.1073/pnas.0700050104 . — PMID 17360352 .
29. ↑ Jerrold I. Davis, Kevin C. Nixon. Populációk, genetikai variáció és a filogenetikai fajok elhatárolása  //  Szisztematikus biológia. — 1992-12-01. — Vol. 41 , iss. 4 . — P. 421–435 . — ISSN 1063-5157 . - doi : 10.1093/sysbio/41.4.421 .
30. ↑ Lambert DM , Baker A. , ​​Huynen L. , Haddrath O. , Hebert PD , Millar CD Lehetséges az ősi élet nagyszabású DNS-alapú leltározása?  (angol)  // The Journal of heredity. - 2005. - 20. évf. 96, sz. 3 . - P. 279-284. doi : 10.1093 / jhered/esi035 . — PMID 15731217 .
31. ↑ Rubinoff D. , Cameron S. , Will K. A genomikai perspektíva a mitokondriális DNS hiányosságairól a "vonalkódos" azonosításhoz.  (angol)  // The Journal of heredity. - 2006. - Vol. 97, sz. 6 . - P. 581-594. doi : 10.1093 / jhered/esl036 . — PMID 17135463 .
32. ↑ Malte C. Ebach, Marcelo R. de Carvalho. Antiintellektualizmus a DNS vonalkódoló vállalatban  // Zoologia (Curitiba). - T. 27 , sz. 2 . – S. 165–178 . — ISSN 1984-4670 . - doi : 10.1590/S1984-46702010000200003 . Az eredetiből archiválva: 2010. december 20.
33. ↑ Kerr KC , Stoeckle MY , Dove CJ , Weigt LA , Francis CM , Hebert PD Észak-amerikai madarak átfogó DNS-vonalkód-lefedettsége.  (angol)  // Molekuláris ökológiai megjegyzések. - 2007. - Vol. 7, sz. 4 . - P. 535-543. - doi : 10.1111/j.1471-8286.2007.01670.x . — PMID 18784793 .
34. ↑ Daniel J. Funk, Kevin E. Omland. Fajszintű parafília és polifilia: gyakoriság, okok és következmények, az állatok mitokondriális DNS-éből származó betekintésekkel  // Annual Review of Ecology, Evolution and Systematics. - 2003-01-01. - T. 34 , sz. 1 . – S. 397–423 . - doi : 10.1146/annurev.ecolsys.34.011802.132421 .
35. ↑ Meyer CP , Paulay G. DNS vonalkódolás: átfogó mintavételen alapuló hibaarányok.  (angol)  // Public Library of Science Biology. - 2005. - 20. évf. 3, sz. 12 . — P. e422. - doi : 10.1371/journal.pbio.0030422 . — PMID 16336051 .
36. ↑ Hurst GD , Jiggins FM Problémák a mitokondriális DNS-sel mint markerrel populációs, filogeográfiai és filogenetikai vizsgálatokban: az öröklött szimbionták hatásai.  (angol)  // Proceedings. Biológiai tudományok / The Royal Society. - 2005. - 20. évf. 272. sz. 1572 . - P. 1525-1534. - doi : 10.1098/rspb.2005.3056 . — PMID 16048766 .
37. ↑ Wiemers M. , Fiedler K. Létezik-e a DNS vonalkódolási rés? - esettanulmány kék pillangókról (Lepidoptera: Lycaenidae).  (angol)  // Határok a zoológiában. - 2007. - Vol. 4. - P. 8. - doi : 10.1186/1742-9994-4-8 . — PMID 17343734 .
38. ↑ ABRS – Az élő fajok száma Ausztráliában és a világjelentés – Excutive Summary (2007. szeptember 11.). Letöltve: 2016. április 29. Az eredetiből archiválva : 2007. szeptember 11.. (határozatlan)
39. ↑ Desalle R. Fajok felfedezése versus fajok azonosítása a DNS vonalkódolási erőfeszítéseiben: válasz a Rubinoffra.  (angol)  // Természetvédelmi biológia : a Természetvédelmi Biológiai Társaság folyóirata. - 2006. - Vol. 20, sz. 5 . - P. 1545-1547. - doi : 10.1111/j.1523-1739.2006.00543.x . — PMID 17002772 .