Coomassie

Az oldal jelenlegi verzióját még nem ellenőrizték tapasztalt közreműködők, és jelentősen eltérhet a 2016. augusztus 30-án áttekintett verziótól ; az ellenőrzések 14 szerkesztést igényelnek .
Coomassie ragyogó kék
Tábornok
Hagyományos nevek CI 42660, CI Acid Blue 83
Brilliant indocyanine 6B, Brillantindocyanin 6B
Brilliant Cyanine 6B, Serva Blue R
Chem. képlet C 45 H 44 N 3 NaO 7 S 2 (nátriumsó)
Fizikai tulajdonságok
Moláris tömeg 825,97 g/ mol
Kémiai tulajdonságok
Oldhatóság
 • vízben hideg vízben nem oldódik, forró vízben kevéssé oldódik, etanolban oldódik
Osztályozás
Reg. CAS szám 6104-59-2
PubChem 61365
Reg. EINECS szám 228-060-5
MOSOLYOK   [ http://chemapps.stolaf.edu/jmol/jmol.php?model=CCN%28CC1%3DCC%28%3DCC%3DC1%29S%28%3DO%29%28%3DO%29%5BO-%5D% 29C2%3DCC%3DC%28C%3DC2%29C%28%3DC3C%3DCC%28%3D%5BN%2B%5D%28CC%29CC4%3DCC%28%3D%0ACC%3DC4%29S%28%3DO%29% 28%3DO%29%5BO-%5D%29C%3DC3%29C5%3DCC%3DC%28C%3DC5%29NC6%3DCC%3DC%28C%3DC6%29OCC.%5BNa%2B%5D CCN(CC1=CC(=) CC=C1)S(=O)(=O)[O-])C2=CC=C(C=C2)C(=C3C=CC(=[N+](CC)CC4=CC(= CC=C4) )S(=O)(=O)[O-])C=C3)C5=CC=C(C=C5)NC6=CC=C(C=C6)OCC.[Na+]]
InChI   InChI=1S/C45H45N3O7S2.Na/c1-4-47(31-33-9-7-11-43(29-33)56(49.50)51)40-23-15-36(16-24-40) 45(35-13-19-38(20-14-35)46-39-21-27-42(28-22-39)55-6-3)37-17-25-41(26-18- 37)48(5-2)32-34-10-8-12-44(30-34)57(52,53)54;/h7-30H,4-6,31-32H2,1-3H3,(H2,49, 50,51,52,53,54);/q;+1/p-1NKLPQNGYXWVELD-UHFFFAOYSA-M
ChemSpider 55296
Biztonság
Rövid karakter. veszély (H) H201 , H202 , H235+H410
elővigyázatossági intézkedések. (P) P201
GHS piktogramok A CGS rendszer "Gázpalack" piktogramjaA CGS rendszer "Robbanó bomba" piktogramja
NFPA 704 NFPA 704 négyszínű gyémánt 0 0 0
Az adatok standard körülményeken (25 °C, 100 kPa) alapulnak, hacsak nincs másképp jelezve.
 Médiafájlok a Wikimedia Commons oldalon

A Coomassie Brilliant Blue két, egymással szorosan összefüggő trifenil-metán festék neve, amelyeket a textilipar számára fejlesztettek ki, de ma már széles körben használják az analitikai biokémiában fehérjék színezésére. A Coomassie Brilliant Blue G-250 abban különbözik az R-250-től, hogy két metilcsoportja van. A "Coomassie" név az Imperial Chemical Industries bejegyzett védjegye .

A felfedezés neve és története

A Coomassie nevet a 19. század végén a Blackley Company védjegyeként jegyezte be a gyapjúfestékekre. [1] 1896- ban, a negyedik angol-ashanti háború idején a brit csapatok elfoglalták Coomassie városát (ma Kumasi Ghánában ) . 1918- ban a Coomassie védjegy tulajdonosa, a Levinstein Ltd a British Dyestuffs részévé vált, amelyet 1926-ban az Imperial Chemical Industries vett át. [2] Az Imperial Chemical Industries jelenleg nem gyárt festékeket, de továbbra is a Coomassie védjegy tulajdonosa.

A trifenil-metán kénszármazékain alapuló kék festékeket először Max Weiler szerezte meg 1913-ban, aki Wuppertal városában (Németország) dolgozott. [3] [4] [5] [6]

A biokémiai folyóiratokban megjelent cikkek gyakran nem írják le pontosan, hogy melyik "Coomassie" festéket használták. Az en:Color Index International színlistája több mint 40 színezéket tartalmaz, amelyek nevében a „Coomassie” kifejezés szerepel. A Merck Index (10. kiadás) Coomassie Blue RL (Acid Blue 92, CI 13390) teljesen más szerkezetű.

Festék színe

Az "R" utótag a Coomassie Brilliant Blue R-250 festék nevében a Red (piros) szó rövidítése, mivel a festék kék színe enyhén vöröses árnyalatú. A "G" utótaggal ellátott festékváltozat enyhén zöldes árnyalatú. A „250” számok a festék tisztaságát jelölik.

A színezékek színe a közeg savasságától függ. A "G" festéket részletesen tanulmányozták. [7] 0 alatti pH - értéknél a festék vörös színű és abszorpciós maximuma 470 nm hosszon. Körülbelül 1 pH-értéknél a festék zöld színű, az abszorpciós maximum 620 nm. pH 2 felett a festék élénkkék, abszorpciós maximuma 595. pH 7-nél a festék moláris extinkciós együtthatója 43 000 M -1 cm -1 . [7]

Az oldat színének változása a festékmolekula töltésében bekövetkezett változásnak felel meg. A piros formában a három nitrogénatom pozitív töltésű. A két kénsavmaradék pKa - értéke nagyon alacsony , ezért általában negatív töltésűek, így nullához közeli pH-értéken a festék +1 nettó töltésű kation. A zöld szín egy töltetlen molekulának felel meg. 7-es pH-értéken a difenil-aminban csak a nitrogénatomnak van pozitív töltése, így a molekula egésze egy -1 össztöltésű anion. A két proton elvesztéséhez szükséges pKa értékek 1,15 és 1,82. Az utolsó proton lúgos közegben leválik, és a molekula rózsaszínes színt kap ( pK a 12,4). [7]

A színezékek komplexet képeznek anionos detergensekkel, például nátrium-lauril-szulfáttal . [8] Egy ilyen komplex képződése stabilizálja a festék semleges formájának zöld színét. Ez a hatás befolyásolhatja a koncentráció Bradford módszerrel történő meghatározását . Valószínű, hogy az anionos detergensek versengenek a festékkel a fehérjekötésért.

Használata a biokémiában

A Coomassie Brilliant Blue R-250-et fehérjék festésére használták 1964 -ben [9] . A fehérjemintákat elektroforézissel választottuk el cellulóz-acetát lapon . A lapot szulfosalicilsavba helyeztük a fehérjék rögzítésére, majd átvittük a festékoldatba.

1965-ben Coomassie Brilliant Blue R-250-et használtak fehérjék festésére poliakrilamid gél elektroforetikus elválasztás után [10] . A gélt metanolt, ecetsavat és vizet tartalmazó festékoldatba helyeztük. A fehérjefestés után a poliakriamid gélt (PAAG) elektroforetikusan le kellett mosni. Kimutatták továbbá, hogy a gél ecetsavoldattal mosható.

A "G" festéket először 1967 -ben használták fehérjék megjelenítésére poliakrilamid gélben , amikor a festéket ecetsav metanolos oldatában oldották [11] .

Később kimutatták, hogy a fehérjecsíkok festhetők kolloid "G" festék nélkül, triklór-ecetsav oldatban metanol nélkül. Ennek a protokollnak a használata nem igényli a gél mosását [12] .

A modern protokollok a "G" színezék kolloid formáját használják foszforsavat, etanolt (vagy metanolt) és ammónium-szulfátot tartalmazó oldatban [13] [14] [15] [16] .

A Bradford-módszer a Coomassie Brilliant Blue G-250 spektrális tulajdonságait használja az oldatban lévő fehérje mennyiségének meghatározására [17] . Ehhez foszforsavas és etanolos festékoldatot adnak a fehérjemintához. Savas körülmények között a festék barna színű, de fehérjéhez kötve kék színűvé válik. Az oldat optikai abszorpcióját 595 nm hullámhosszon mérjük.

Egy fehérje negatív töltésű Coomassie Brilliant Blue G-250-hez való kötődése negatív töltést kölcsönöz a fehérjének, amely felhasználható a PAAG -ban lévő fehérjekeverékek szétválasztására nem denaturáló körülmények között a Blue Native PAGE módszerrel [18] [19] .

A komplex mobilitása a poliakrilamid gélben a fehérje méretétől, a fehérjekomplextől és a fehérjéhez kötött festék mennyiségétől függ.

Lásd még

Jegyzetek

  1. ↑ Fox, MR Dye-makers of Great Britain 1856-1976: A History of Chemists, Companies, Products and  Changes . - Manchester: Imperial Chemical Industries, 1987. - 38. o.
  2. ↑ Fox, MR Dye-makers of Great Britain 1856-1976: A History of Chemists, Companies, Products and  Changes . - Manchester: Imperial Chemical Industries, 1987. - 259. o.
  3. ↑ Színindex  (határozatlan) . — 3. - Bradford: Society of Dyers and Colourists, 1971. - V. 4. - S. 4397-4398. Archivált másolat (nem elérhető link) . Hozzáférés dátuma: 2013. május 27. Az eredetiből archiválva : 2011. július 19. 
  4. ↑ , "Procédé de production de colorants de la série du triarylméthane", FR 474260 szabadalom , kiadva 1915.02.16.
  5. ↑ Weiler, Max, "Blue Triphenylmethane Dye", US szabadalom 1218232 , kiadva 1917-03-06
  6. ↑ , "Triarilmetán-színezékek gyártása", GB 275609 számú szabadalom , kiadva 1927-11-03
  7. ↑ 1 2 3 Chial, HJ; Thompson, HB; Splittgerber, AG A Coomassie Blue G töltésformáinak spektrális vizsgálata  //  Analytical Biochemistry : folyóirat. - 1993. - 1. évf. 209 , sz. 2 . - P. 258-266 . - doi : 10.1006/abio.1993.1117 . — PMID 7682385 .
  8. ↑ Compton, SJ; Jones, CG A festékválasz és az interferencia mechanizmusa a Bradford fehérjevizsgálatban   // Analytical Biochemistry : folyóirat. - 1985. - 1. évf. 151. sz . 2 . - P. 369-374 . - doi : 10.1016/0003-2697(85)90190-3 . — PMID 4096375 .
  9. ↑ Fazekas de St. Groth, S.; Webster, R. G.; Datyner, A. Két új festési eljárás fehérjék kvantitatív becslésére elektroforetikus csíkokon   // Biochimica et Biophysica Acta : folyóirat. - 1963. - 1. évf. 71 . - P. 377-391 . - doi : 10.1016/0006-3002(63)91092-8 . — PMID 18421828 .
  10. ↑ Meyer, T.S.; B. B.  B. B. B. R.  250 : folyóirat. - 1965. - 1. évf. 107 , sz. 1 . - P. 144-145 . - doi : 10.1016/0304-4165(65)90403-4 . — PMID 4159310 .
  11. ↑ Altschul, A.M.; Evans, WJ Zone elektroforézis poliakrilamid géllel  (angol)  // Methods in Enzymology  : Journal. - 1967. - 1. évf. 11 . - 179-186 . o . - doi : 10.1016/S0076-6879(67)11019-7 . . 184. oldal személyes kommunikáció WJ Saphonovtól.
  12. ↑ Dizel, W.; Kopperschlager, G.; Hofmann, E. Egy továbbfejlesztett eljárás fehérjefestéshez poliakrilamid gélekben új típusú Coomassie Brilliant Blue-val  //  Analytical Biochemistry : folyóirat. - 1972. - 1. évf. 48 , sz. 2 . - P. 617-620 . - doi : 10.1016/0003-2697(72)90117-0 . — PMID 4115985 .
  13. ↑ Neuhoff, V.; Stamm, R.; Eibl, H. Tiszta háttér és nagyon érzékeny fehérjefestés Coomassie Blue festékekkel poliakrilamid gélekben: szisztematikus elemzés  //  Electrophoresis : Journal. - 1985. - 1. évf. 6 , sz. 9 . - P. 427-448 . - doi : 10.1002/elps.1150060905 .
  14. ↑ Candiano, G.; Bruschi, M.; Musante, L.; Santucci, L.; Ghiggeri, G. M.; Carnemolla, B.; Orecchia, P.; Zardi, L.; Righetti, PG Kék ezüst: nagyon érzékeny kolloid Coomassie G-250 festés proteomanalízishez  //  Elektroforézis : folyóirat. - 2004. - 20. évf. 25 , sz. 9 . - P. 1327-1333 . - doi : 10.1002/elps.200305844 . — PMID 15174055 .
  15. ↑ Steinberg, T. H. Protein gel festési módszerek: bevezetés és áttekintés  // Methods in Enzymology  : Journal  . - 2009. - 1. évf. 463 . - P. 541-563 . - doi : 10.1016/S0076-6879(09)63031-7 . — PMID 19892191 .
  16. ↑ Pink, M.; Verma, N.; Rettenmeier, A.W.; Schmitz-Spanke, S. CBB festési protokoll nagyobb érzékenységgel és tömegspektrometriai kompatibilitással  //  Elektroforézis : folyóirat. - 2010. - 20. évf. 31 , sz. 4 . - P. 593-598 . - doi : 10.1002/elps.200900481 . — PMID 20162584 .
  17. ↑ Bradford, MMés érzékeny módszer a fehérjék  mikromennyiségére . : folyóirat. - 1976. - 1. évf. 72 . - P. 248-254 . - doi : 10.1016/0003-2697(76)90527-3 . — PMID 942051 .
  18. ↑ Schägger, H.; Jagow, G. Blue natív elektroforézis membránfehérje komplexek izolálására enzimatikusan aktív formában  //  Analytical Biochemistry : folyóirat. - 1991. - 1. évf. 199 , sz. 2 . - P. 223-231 . - doi : 10.1016/0003-2697(91)90094-A . — PMID 1812789 .
  19. ↑ Wittig, I.; Braun, HP; Schägger, H. Blue native PAGE   // Nature Protocols : folyóirat. - 2006. - Vol. 1 , sz. 1 . - P. 418-428 . - doi : 10.1038/nprot.2006.62 . — PMID 17406264 .

Irodalom

Protokollok