Fordított fázisú kromatográfia

A fordított fázisú (reverz fázisú) kromatográfia (RPC) a kromatográfia egy olyan változata , amelyben az állófázis nem poláris [1] . A kromatográfia ezen változata folyadékkromatográfiára utal (a gázkromatográfiával szemben).

A "fordított fázis" kifejezésnek történelmi háttere van. Az 1970-es években a folyadékkromatográfia a legtöbb esetben szilárd állófázist (más néven " oszlopot ") használt, amely módosítatlan szilícium- vagy alumínium töltőanyagot tartalmazott. Ma ezt a módszert "normál fázisú kromatográfiának" nevezik. Normál fázisú kromatográfia esetén az állófázis hidrofil (nagy affinitással rendelkezik a mozgófázisban lévő hidrofil molekulákhoz). Ezért a mozgófázisban lévő hidrofil molekulák hajlamosak megkötődni ( adszorbeálódni ) az oszlopon, míg a hidrofób molekulákA molekulák áthaladnak az oszlopon, és először eluálódnak. A normál fázisú kromatográfiában a hidrofil molekulák a mobilfázisú oldat polaritásának növelésével eluálhatók az oszlopról.

A szilárd bázishoz kovalensen kötött alkilláncokat alkalmazó módszerek megjelenése lehetővé tette egy hidrofób állófázis létrehozását, amely erős affinitással rendelkezik a hidrofób vegyületekhez. A hidrofób állófázis alkalmazása a normálfázisú kromatográfia ellentéteként vagy „fordítottjaként” tekinthető – innen ered a „fordított fázisú kromatográfia” [2] [3] kifejezés . A fordított fázisú kromatográfia poláris (vizes) mozgó fázist használ. Ennek eredményeként a poláris mozgófázisban lévő hidrofób molekulák a hidrofób állófázisra adszorbeálódnak, míg a mozgófázisban lévő hidrofil molekulák áthaladnak az oszlopon, és először eluálódnak [2] [4] . A hidrofób molekulák a mozgófázis polaritásának csökkentésével eluálhatók az oszlopról olyan szerves (nem poláris) oldószerek használatával, amelyek csökkentik a hidrofób kölcsönhatásokat. Minél hidrofóbabb egy molekula, annál jobban kötődik az állófázishoz, és annál nagyobb a szerves oldószer koncentrációja, amelyre a molekula eluálásához lesz szükség.

A más kromatográfiás módszerekben használt matematikai és kísérleti feltételezések közül sok az OFC-re is vonatkozik (pl. az „elválasztás felbontása” az oszlophossztól függ). Sokféle molekula szétválasztására is használható. Ezt a módszert nem szokták fehérjék szétválasztására használni, mert a használt szerves oldószerek a legtöbb fehérjét denaturálhatják. Ezért ebben az esetben a normál fázisú kromatográfia elfogadhatóbb módszer.

Manapság az OFC-t gyakran használják elemzési célokra. Az RPC-hez számos különböző állófázis létezik, ami nagyobb rugalmasságot tesz lehetővé az elválasztási módszerek kiválasztásában.

Álló (stacionárius) fázis

1. táblázat: Fordított fázisú HPLC-ben használt fő állófázisok [5] [6] .
Kijelölés Leírás Szerkezet
C1, TMS, SAS, trimetil Nagy szelektivitással rendelkezik a poláris vegyületek és a nagyszámú funkciós csoportot tartalmazó vegyületek elválasztásában. Legkevésbé az alkilcsoportokat tartalmazó vegyületeket tartja meg a nem poláros oldószerekben.
C2, RP-2, dimetil Retenciója magasabb, mint a C1, és kisebb, mint a C4, C8 és C18.
C3, propil Peptidek és fehérjék hidrofób interakciós kromatográfiájában ( HIC ) használják.
C4, butil Alkalmazható HIC és ionpár kromatográfiára. Nem poláris oldószerekben kisebb a visszatartása, mint a C8 és C18 fázis. Ez a 300Å pórusátmérőjű anyag ideális nagy fehérjék és hidrofób peptidek elemzéséhez.
C5, Pentil 300Å pórusátmérőjével hidrofób fehérjék és peptidek fordított fázisú szétválasztására használják. Ellenáll a hidrolízisnek, mint a C4.
C6, hexil Ionpár kromatográfiára használják. Kisebb a visszatartása , mint a C8 és C18.
C8, MOS, RP-8, LC8, oktil Szelektivitását tekintve közel áll a C18-hoz, de visszatartása alacsonyabb. Széles körben használják gyógyszerek, nukleotidok, szteroidok stb. elemzésében. 300Å pórusátmérőjével ez az anyag kiválóan alkalmas peptidek és kisméretű hidrofil fehérjék szétválasztására.
C12, Dodecil A C18-nál rövidebb szénláncának köszönhetően jó kölcsönhatást és élesebb csúcsformát biztosít a nem poláris és közepesen poláris vegyületek számára.
C18, ODS, RP-18, LC-18, oktadecil Klasszikus fordított fázisú anyag, a legmagasabb apoláros oldószerek visszatartásával. Kiválóan működik ionpár kromatográfiában. A legszélesebb körben alkalmazható (peptidek, nukleozidok, nukleotidok, szteroidok, gyógyszerek, vitaminok, zsírsavak, növényvédő szerek, stb. szétválasztása). 300Å pórusátmérőjével ezt az anyagot kis hidrofób peptidek elválasztására használják.
C6H5 , fenil _ _ Egyedülálló szelektivitással rendelkezik, és aromás vegyületek elválasztására szolgál. 300Å pórusátmérőjű, ezt az anyagot HIC-hez használják.
C6H5 ( C3H6O linker ) , fenil - éter _ Erősen poláris aromás anyagok elkülönítésére szolgál. Szelektivitása különbözik a fenil- és a fenil-hexil fázistól.
C6H5 ( C6H12 linker ) , fenil - hexil _ Ugyanolyan szelektivitású, mint a fenilfázis, de sokkal nagyobb a stabilitása.
C 6 F 5 , PFP Szubsztituált aromás vegyületek elemzésére használják. Szelektivitása különbözik a fenil-hexil-, klasszikus fenil- és alkilfázisoktól.
CN, CPS, PCN, ciano, cianopropil, nitril Használható fordított fázisú vagy normál fázisú anyagként. Mivel enyhén poláris, ez a fázis kiváló szelektivitással rendelkezik a poláris vegyületek elválasztásában. Ezenkívül gyorsan kiegyensúlyozható, ami munka közben értékes tulajdonság .

gradiens elúciós módban. Különféle gyógyszerek (például antidepresszánsok stb.) elemzésére használják .

NH 2 , APS, amino, aminopropil -szilil Használható fordított fázisú, normál fázisú és ioncserélő kromatográfiához (gyenge anioncserélő). Fordított fázisú kromatográfiában használják szénhidrátok elválasztására.
OH, diol, glicerin Használható fordított fázisú vagy normál fázisú anyagként. Fordított fázisként a peptidek és fehérjék gélszűrős kromatográfiájában (GFC) használják.

Mobil fázis

Az analitok fordított fázisú oszlopról való eluálására víz vagy vizes pufferoldatok és szerves oldószerek keverékét használják [2] . A szerves oldószereknek vízzel elegyedniük kell. A leggyakoribb az acetonitril , a metanol és a tetrahidrofurán (THF). Használható etanol vagy izopropanol is . Az eluálás történhet izokratikusan (a víz-szerves oldószer keverék százalékos változása a teljes elválasztási folyamat alatt), vagy gradiens alkalmazásával (a víz-szerves oldószer arány változik a folyamat során, általában a polaritás csökkenésének irányába). A mozgófázis pH-értéke nagyban befolyásolhatja a keverék elválasztását, és megváltoztathatja az analízis szelektivitását (a vizsgált vegyületek kibocsátásának sorrendjét).

A töltött analitok fordított fázisú oszlopon ionpárok segítségével választhatók szét (más néven ionkölcsönhatás). Ez a technika „fordított fázisú ionpáros kromatográfia” néven ismert.

Jegyzetek

  1. ↑ IUPAC Gold Book internetes kiadás: " fordított fázisú kromatográfia ".
  2. ↑ 1 2 3 akul mehta. A fordított fázisú kromatográfia elve HPLC/UPLC (animációval  ) . PharmaXChange (2012. december 27.). Letöltve: 2013. január 10. Az eredetiből archiválva : 2013. április 15..
  3. ↑ I Molnár és C Horváth. Poláris biológiai anyagok fordított fázisú kromatográfiája: katekolvegyületek elválasztása nagy teljesítményű folyadékkromatográfiával  (angol)  // Clinical Chemistry : Journal. - 1976. - szeptember ( 22. évf. , 9. sz.). - P. 1497-1502 . - PMID 8221 .
  4. ↑ (Clinical Biochemistry, TWHrubey, 54)
  5. ↑ jelenség. HPLC kötésű fázisok . http://www.phenomenex.com . Letöltve: 2017. szeptember 3. Az eredetiből archiválva : 2017. szeptember 3.
  6. ↑ Aquilon. Rövid útmutató a HPLC-hez . www.akvilon.su .

Linkek

  Ugrás a Wikidata elemre  Szótárak és enciklopédiák