Ames teszt

Az Ames - teszt egy olyan  genetikai teszt, amely Salmonella typhimurium baktériumot használ vizsgálati tárgyként [1] . A kémiai vegyületek mutagén potenciáljának felmérésére tervezték. A pozitív vizsgálati eredmény azt jelzi, hogy a vegyi anyag karcinogén tulajdonságokkal rendelkezhet. Mivel a rosszindulatú daganatok gyakran DNS-károsodással járnak együtt, a tesztet gyors módszerként is használják különböző kémiai vegyületek rákkeltő potenciáljának felmérésére, valamint egy másik hasonló módszer, a standard rágcsálóteszt kiegészítéseként [2] . A technikát az 1970-es évek elején egy sor tanulmányban leírták Bruce Ames és csoportja a Kaliforniai Egyetemen, Berkeleyben.

Vizsgálati eljárás

A teszt a Salmonella typhimurium baktérium néhány törzsét használja , amelyek mutációkat hordoznak a hisztidin szintézisében részt vevő génekben (vagyis ezek auxotróf mutánsok, amelyek növekedéséhez hisztidin mesterséges bevitelére van szükség). A teszt azt vizsgálja, hogy egy feltételezett mutagén okozhat-e ennek a génnek a fordított mutációját, amelyben a törzs képes lesz arra, hogy hisztidint nem tartalmazó táptalajon növekedjen. A tesztelésre szánt törzseket úgy választják ki, hogy leolvasási kereteket és pontmutációkat is tartalmazzanak a hisztidin szintéziséért felelős génekben, ami lehetővé teszi a mutagének kimutatását különböző mechanizmusok befolyásolásával. Egyes vegyszerek nagyon specifikusak, és ezért csak egy vagy két törzsben okoznak reverziót [3] . A tesztben használt törzsek a lipopoliszacharid szintéziséért felelős gének mutációit is hordozzák, így a baktériumsejtfalak átjárhatóbbá válnak [4] . Emellett a javítási folyamatokért felelős egyes gének hiánya érzékenyebbé teszi a tesztet [5] . A baktériumok és emlősök anyagcseréje közötti alapvető különbségek miatt a patkányok májából származó kivonat felhasználható a tesztben az anyagcsere hatásának szimulálására, mivel egyes vegyületek, például a benzo[a]pirének nem rendelkeznek mutagén hatással. aktivitása, de az anyagcsere során keletkező származékaik genotoxicitásra tesznek szert [6] .

A baktériumokat agaróz táptalajra vetik be Petri-csészékben. A tápközeg kis mennyiségű hisztidint tartalmaz. Ez a hisztidin mennyiség a táptalajban elegendő ahhoz, hogy bizonyos ideig biztosítsa a baktériumok létfontosságú tevékenységét és növekedését, és lehetővé tegye számukra a mutációt ezalatt az idő alatt. A táptalajban lévő hisztidin kimerülése után csak a revertáns telepek maradnak életben, amelyek képesek lettek saját hisztidinüket szintetizálni. A vizsgált mutagén faktort nem tartalmazó táptalajon beoltott baktériumok kontrollként szolgálnak. Az inkubálást 48 órán belül végezzük. A vizsgált anyag mutagén potenciálját a vizsgált telepek számával arányosan becsülik meg.

Az eredmények értelmezésének nehézségei

Mivel a szalmonellák prokarióták, ez nem ideális modell az emberekre való extrapoláláshoz. A teszt eredeti változata nem vette figyelembe a májban képződő metabolitokat. A teszt módosított változata az S9 májfrakciót használja, amely segít a rendszer teljesebb újraalkotásában, és annak vizsgálatában, hogy az eredeti anyag származékai képesek-e pozitív eredményt (azaz genotoxicitást) adni [7] . Számos olyan gyógyszer, amely nitrátcsoportokat tartalmaz, amelyek valójában nem jelentenek egészségügyi veszélyt, néha hamis pozitív választ adnak az Ames-tesztben. Ilyen anyag például a nitroglicerin. Pozitív eredményt ad az Ames tesztben, bár a gyógyászatban még ma is használják. Az Ames-teszt nagyon magas koncentrációjú anyagokat használ nitrátokkal együtt, amelyek nitrogén-monoxidot (NO) képezhetnek, amely egy fontos jelzőmolekula, amely felelős a hamis pozitív eredményekért. További toxikológiai vizsgálatokra van szükség az Ames-teszt pozitív eredményének megcáfolásához. Az Ames-tesztben kapott eredmények integrált mutatóvá alakításához a mutagén hatás integrált értékelésére szolgáló szabványos sémát használnak.

Lásd még

Jegyzetek

  1. Mortelmans K, Zeiger E. Az Ames Salmonella/mikroszóma mutagenitási vizsgálat // Mutat. Res.. - Elsevier BV, 200. - No. 445 (1-2) . - S. 29060 .
  2. Közegészségügyi Enciklopédia. Ames teszt  // Mutat. Res.. - enotes.com, 2002. Archiválva az eredetiből 2009. február 4-én.
  3. Nishant G. Chapla, E. G. Gurney, James A. Miller és H. Bartsch. Rákkeltő anyagok, mint kereteltolódási mutagének: A 2-acetilaminofluorén és más aromás amin rákkeltő anyagok metabolitjai és származékai  // PNAS. - 1972. - 69. szám (11) .
  4. Bruce N. Ames, Frank D. Lee és William E. Durston. Továbbfejlesztett bakteriális tesztrendszer a mutagének és rákkeltő anyagok kimutatására és osztályozására  // PNAS. - 1973. - 70. szám (3) . - S. 782-786 .
  5. Joyce McCann, Neil E. Spingarn, Joan Kobori és Bruce N. Ames. A rákkeltő anyagok kimutatása mutagénként: R-faktor plazmidokkal rendelkező baktériumtesztelő törzsek  // PNAS. - 1975. - 72. szám (3) . - S. 979-983 .
  6. Bruce N. Ames, William E. Durston, Edith Yamasaki és Frank D. Lee. A rákkeltő anyagok mutagének: Egy egyszerű tesztrendszer, amely a máj homogenizátumait aktiválja és kimutatja a baktériumokat  // PNAS. - 1973. - 70. sz . - doi : 10.1073/pnas.70.8.2281 .
  7. Zhengyin, Yan, Gary, Caldwell. Optimalizálás a gyógyszerkutatásban: in vitro módszerek. „Az Ames-teszt javítása humán máj S9 készítmény felhasználásával” című fejezet. — Farmakológiai és toxikológiai módszerek. – Humana Press, 2004.