Konfokális mikroszkópia

Az oldal jelenlegi verzióját még nem ellenőrizték tapasztalt közreműködők, és jelentősen eltérhet a 2016. június 26-án áttekintett verziótól ; az ellenőrzések 58 szerkesztést igényelnek .

A konfokális mikroszkópia (confokális lézer pásztázó mikroszkópia, CLSM ( angolul  confocal laser scanning microscopy )) a klasszikus fénymikroszkópiához képest jelentős kontraszttal és térbeli felbontással rendelkező fényoptikai mikroszkóp típus, amelyet a képsíkban elhelyezett tűlyukkal (pinhole) érnek el, ill. a nem a lencse fókuszsíkjából kibocsátott háttérszórt fény áramlásának korlátozása [1] . Ez lehetővé teszi, hogy a mintán belül a fókuszsík különböző mélységeiben képsorozatokat készítsünk (ún. a minta mélységi optikai metszete), majd ezekből a sorozatokból rekonstruáljuk a minta háromdimenziós képét. A konfokális mikroszkópiát széles körben alkalmazzák a biológiában, az orvostudományban, az anyagtudományban és a félvezetőfizikában.

Történelem

Az első prototípusok

1940-ben Hans Goldmann, a svájci berni szemész kifejlesztett egy réslámpás rendszert a szemvizsgálatok dokumentálására [2] . Ezt a rendszert néhány későbbi szerző az első konfokális optikai rendszernek tekinti. [3] [4]

1943-ban Zun Koana kiadta a konfokális rendszert. [3] 1951-ben Hiroto Naora, Koana munkatársa leírta a konfokális mikroszkópot a Science for spektrofotometriában [5] .

Az 1950-es években a biológusoknak növelniük kellett a fluorokrómmal jelölt tárgyak képeinek kontrasztját vastag szövetmetszetekben [6] . A probléma megoldására Marvin Minsky , az Egyesült Államok Massachusetts Institute of Technology professzora konfokális séma alkalmazását javasolta fluoreszcens mikroszkópokhoz. 1957-ben Minsky szabadalmat kapott erre a rendszerre [7] .

Tandem pásztázó mikroszkóp

Az 1960-as években Mojmir Petran csehszlovák tudós, a Pilsen-i Károly Egyetem Orvostudományi Karának munkatársa kifejlesztette a Tandem Scanning Microscope-ot, az első kereskedelmi forgalomban lévő konfokális mikroszkópot, amely forgó korongot – a Nipkow-korongot – használt  több pontszerű gerjesztési forrás létrehozására és lokalizálására. és sugárzás. [8] [9]

Petran és kollégája, Milan Hadravsky 1966-ban nyújtott be csehszlovák szabadalmat. David Egger, a Yale Egyetem munkatársa és közvetlenül Mojmir Petran 1967-ben jelent meg a Science folyóiratban [10] . Egy második publikáció 1968-ban ismerteti a műszer elméletét és műszaki részleteit [11] . 1970-ben a találmányt szabadalmaztatták az Egyesült Államokban. [12]

Konfokális mikroszkóp kombinálása lézeres megvilágítóval

1969-ben és 1971-ben David Egger és Paul Davidovich, a Yale Egyetem tudósai úttörő tanulmányokat tettek közzé az első konfokális lézeres pásztázó mikroszkópról [13] [14] Pontszkenner volt, vagyis csak egy megvilágítási folt keletkezett. Az idegszövet megfigyelésére visszavert fényben epi-megvilágítást alkalmaztak. Koherens sugárzás forrásaként egy 5 mW -os , 633 nm hullámhosszú hélium-neon lézert használtak. A lézersugarat egy félig átlátszó tükör verte vissza az objektív irányába . Az objektív egy egyszerű objektív volt, 8,5 mm-es gyújtótávolsággal. Az összes korábbi (és későbbi konfokális rendszerektől) eltérően a mintát ennek az objektívnek a mozgásával szkennelték (objektív szkennelés), ami a fókuszpont elmozdulásához vezetett. A visszavert fényt visszavezették egy áttetsző tükörbe, egy másik lencsével egy membránra ( pinhole ) fókuszálva, amely mögött egy fénysokszorozó csövet helyeztek el . A jelet CRT oszcilloszkóppal vizualizáltuk , a katódsugár a lencsével egyidejűleg mozgott. Egy speciális adapter segítségével Polaroid kamerán lehetett fotózni. Az így kapott fényképek közül hármat egy 1971-es közleményben [14] közöltek .

Marvin Minsky konfokális pásztázó mikroszkópjának lézersugárzást alkalmazó sémáit is kidolgozták [15] . A kutatók figyelme a jövőben a fluoreszcens festékek in vivo vizsgálatokhoz való felhasználásának elemzésére, valamint a konfokális képek minőségének javítására irányult a fluoreszcens sugárzás intenzitásának növelésével.

Szkennelő rendszerek fejlesztése

Colin J. R. Sheppard és Amargioti Chowdhury 1977-ben publikált egy elméleti elemzést a konfokális és lézeres pásztázó mikroszkópokról. [16] Valószínűleg ez volt az első olyan tudományos publikáció, amely a "konfokális mikroszkóp" kifejezést használta. [17] 1978-ban Christoph Kremer és Thomas Kremer kiadtak egy konfokális lézeres pásztázó mikroszkóp tervet, amely fluoreszcens gerjesztést és elektronikus autofókuszt használ. [18] Ez a CLSM modell volt az első, amely a lézeres szkennelést kombinálta a fluoreszcens markerekkel jelölt biológiai objektumok volumetrikus detektálásával. 1978-ban és 1980-ban Colin Sheppard és Tony Wilson oxfordi csoportja egy konfokális rendszert írt le epilézeres megvilágítással, pásztázó fokozattal és fénysokszorozókkal, mint detektorokkal. Az asztal az optikai tengely mentén mozoghatott, ami lehetővé tette a háromdimenziós optikai rétegenkénti metszés végrehajtását [17] . 1979-ben Fred Brackenhoff és munkatársai bebizonyították, hogy az optikai metszet és a jobb optikai felbontás elméleti előnyei a gyakorlatban valóban elérhetőek. [19] 1983-ban I. Cox és S. Sheppard publikálta az első munkát, amelyben a konfokális mikroszkópot személyi számítógép vezérelte. [húsz]

Pontszkennelés lézersugárral

Az 1980-as évek közepén William Bradshaw Amos és John Gralham White és munkatársai a Cambridge-i Molekuláris Biológiai Laboratóriumban megépítették az első konfokális lézerszkenner mikroszkópot. [21] [22] Optikai sémájában a pásztázást a fénysugár szekvenciális minta feletti mozgatásával végezték, nem pedig a mintatáblázat mozgatásával. Ez a séma lehetővé tette a szkennelési sebesség jelentős növelését az inerciális mechanikus letapogató rendszerek elutasítása miatt, és akár négy képkocka / másodperc sebesség elérését (mindegyik 512 sor). [21]

Ezzel párhuzamosan az Egyesült Királyság Orvosi Kutatási Tanácsa (MRC) támogatta egy modern kereskedelmi konfokális mikroszkóp prototípusának kifejlesztését, amelyet később a Bio-Rad megvásárolt, számítógép-vezérléssel és "MRC 500" néven forgalmazták. Az MRC 600 utódja később az első kétfoton fluoreszcens mikroszkóp kifejlesztésének alapja lett, amelyet 1990-ben fejlesztettek ki a Cornell Egyetemen. [19]

A Stockholmi Egyetemen végzett kutatás nagyjából ugyanebben az időben a kereskedelmi CLSM Sarastro-vá is átalakult. [23]

A vállalkozást 1990-ben vásárolta meg a Molecular Dynamics [24] , de a rendszer további fejlesztését végül felhagyták.

1989-ben Fritz Karl és Eckhard Praikschat feltalálta a pásztázó lézerdióda mikroszkópot a részecskeméret elemzésére. [25] [26]

Németországban az 1984-ben alapított Heidelberg Instruments fejlesztette ki a CLSM technológiát, amelyet eredetileg ipari alkalmazásokra szántak, nem biológiára. Az 1990-es évek elején ezt a technológiát a Leica Lasertechnik és a Carl Zeiss aktívan fejlesztette , amelyek akkoriban már sikeresen állítottak elő fénymikroszkópokat megvalósított lézersugaras letapogató sémával, amelyeket később konfokális rendszerré fejlesztettek [27] .

Hogyan működik

A hagyományos fénymikroszkóp optikai sémája a minta teljes , az alkalmazott mikroobjektív mélységélességében elhelyezkedő részének, a konfokális mikroszkóp pedig az objektum egy nagyon vékony metszetének képét képezi azonos mélységi szinten. A CLSM módszert lényegében az optikai rendszer fókuszmélységének szabályozásával érik el.

A konfokális képalkotás elvét 1957-ben Marvin Minsky [28] [29] szabadalmaztatta, és célja a hagyományos fluoreszcens mikroszkópok korlátainak leküzdése. A hagyományos (széles látószögű) fluoreszcens mikroszkópban a teljes mintát egyenletesen megvilágítja a mikroszkóp sugárforrása. Ebben az esetben a teljes mintát egyidejűleg besugározzák és gerjesztik, és a keletkező fluoreszcenciát fotodetektorral vagy mikroszkópos kamerával detektálják, beleértve az objektum nagy háttérrészét is. Ezzel szemben a konfokális mikroszkóp egy spotlámpát (lásd a pontszórási funkciót ) és a detektor előtti optikai konjugált síkban lévő tűlyukat használ az életlen jelek kiküszöbölésére. A fluoreszcens sugárzást tehát csak a fókuszsíkból érzékeljük, így a kép optikai felbontása, különösen a Z tengely mentén (a minta mélysége mentén), sokkal nagyobb, mint a hagyományos fénymikroszkópoké. Mivel azonban a mintából származó fluoreszcencia nagy része blokkolva van, a felbontás növekedése a hasznos jel intenzitásának csökkenésével jár. Ennek a mellékhatásnak a kompenzálására hosszabb detektorexpozíciót és nagy érzékenységű fotodetektorokat, általában PMT - t vagy lavina fotodiódát használnak, amelyek az optikai jelet elektromos jellé alakítják, majd ezt követi a személyi számítógépen történő regisztráció [30] .

Mivel a mintán csak egy fluoreszcens pont van rögzítve, a minta raszteres letapogatása szükséges a 2D vagy 3D kép elkészítéséhez. A lézersugár a minta mentén vízszintes síkban mozog egy vagy több szabályozott dőlésszögű tükör segítségével. Ennek a szkennelési módszernek általában alacsony a beolvasási sebessége, amely azonban változhat. Például a lassabb pásztázás jobb jel-zaj arányt biztosít, ami jobb kontrasztot és nagyobb felbontást eredményez.

Mint ismeretes, a CLSM mélységélessége egyenesen arányos a felhasznált sugárzás hullámhosszával és fordítottan arányos a mikroobjektív numerikus apertúrájával, valamint függ a minta optikai tulajdonságaitól is. Ennek köszönhetően a 3D objektumok egy pontjának szoftveres rekonstrukciója a CLSM-ben történik különböző algoritmusok segítségével. A legelterjedtebb az intenzitásmaximum keresési algoritmusa. [31]

A konfokális mikroszkóp felbontása megegyezik a hagyományos mikroszkópéval, és a diffrakciós határ korlátozza .

ahol  a sugárzás hullámhossza,  az objektív numerikus apertúrája,  a minta és az objektív közötti közeg törésmutatója,  fele annak a szögnek, amelyet az objektív „befog”. A látható tartományban a felbontás ~ 250 nm (NA=1,45, n=1,51), azonban az elmúlt években sikeresen fejlesztettek ki olyan mikroszkópterveket, amelyek a minták fluoreszcenciájának nemlineáris tulajdonságait használják ki. Ebben az esetben a diffrakciós határnál jóval kisebb felbontást érünk el, és ~3-10 nm [32] [33] [34] [35] .

Tekintsük most a kontraszt növelésének kérdését konfokális optikai séma használatakor. Először is, mivel a fény kétszer halad át a lencsén konfokális mikroszkópban, a pontelmosás funkció (a továbbiakban: PSF ) a következő formájú:

,

ahol Pconf a konfokális pont elmosódási függvénye, p pedig a szabályos pontelmosási függvény.

Így a fókuszsík elérhető vastagságát főként az alkalmazott sugárzás hullámhosszának és az objektív numerikus apertúrájának a hányadosa határozza meg, és függ a minta optikai tulajdonságaitól is. Vékony optikai metszetüknek köszönhetően az ilyen típusú mikroszkópok különösen alkalmasak 3D-s képalkotásra és minták felületi profilozására.

A szekvenciális szeletek egy "z-verem"-et alkotnak, amelyet bizonyos szoftverek feldolgozhatnak 3D-s renderelt kép létrehozásához, vagy 2D-s veremben jeleníthetők meg közzététel céljából, a közös intenzitású maximális keresési algoritmusnak köszönhetően. [31]

A konfokális mikroszkópia közvetlen, nem invazív szekvenciális optikai metszetet biztosít ép vastag élő mintákról minimális előkészítési igénnyel, valamint a hagyományos fénymikroszkópiához képest nagyobb laterális felbontással [36] [37] . A biológiai mintákat jellemzően fluoreszcens festékkel ellenfestik, hogy láthatóvá tegyék specifikus régióikat vagy organellumaikat. A tényleges festékkoncentráció azonban nagyon alacsonyan tartható a biológiai rendszerekre gyakorolt ​​hatás minimalizálása érdekében. Így egyes konfokális rendszerek képesek nyomon követni az egyes fluoreszcens molekulákat [38] . Ezenkívül a transzgenikus technológiák olyan organizmusokat hozhatnak létre, amelyek saját fluoreszcens kiméra molekulákat termelnek (GFP-vel, zöld fluoreszcens proteinnel jelölve) [39] .

A nagy kontrasztú konfokális lézeres pásztázó mikroszkóp két felbecsülhetetlen értékű lehetőséget kínál: lehetővé teszi a szövetek sejtszintű vizsgálatát fiziológiai vitalitás állapotában, valamint négy dimenzióban - magasság, szélesség, - a sejtaktivitás eredményeinek (dinamikájának) értékelését. mélység és idő. [40]

Térbeli felbontás konfokális mikroszkópban

A Rayleigh-kritériumot alkalmazva a felbontásra (merülés az eloszlási maximum 26%-a) azt tapasztaljuk, hogy a konfokális mikroszkóp felbontása nő, de nem szignifikánsan. Konfokális mikroszkóp esetén a felbontás (r c ) a következőképpen definiálható [8] [41] [1] :

,

ahol n a relatív törésmutató, D az optikai rendszer bemeneti pupillájának átmérője, λ a hullámhossz, F a mikroobjektív gyújtótávolsága, θ a mikroobjektív nyílásszöge, λ'=λ/n . Hagyományos fénymikroszkóp esetén a felbontás (r r ):

A konfokális mikroszkóp fő előnye azonban nem a Rayleigh-kritérium értelmében vett felbontásnövekedés, hanem a kontraszt jelentős növekedése. A fókuszsíkban lévő hagyományos PSF esetében az első oldalsó maximum amplitúdójának és a fő maximum amplitúdójának aránya 2%, konfokális mikroszkóp esetén ez az arány 0,04%.

A konfokális mikroszkópia növeli a kép kontrasztját az analízis területén fókuszált megvilágítás (gerjesztés) és a képsíkban lévő fluoreszcens írisz használatával. Ez a kontrasztnövekedés akár 200:1 intenzitáskülönbségű objektumok felbontását is eredményezi, valamint a felbontás növekedését is biztosítja mind az objektum síkjában, mind az optikai tengely mentén. A kontraszt növelése mellett a fluoreszcens konfokális mikroszkópia lehetővé teszi a vizsgált tárgy lépésről lépésre történő háromdimenziós rekonstrukcióját többpontos megvilágítás használatával. A pásztázó konfokális mikroszkópia legfejlettebb módszerei közül kiemelendő a mikromembránnal ellátott letapogató lemez és a mátrix fotodetektorok [2] alkalmazása .

Ma már léteznek olyan módszerek, amelyekkel jelentősen meg lehet növelni a konfokális mikroszkóp felbontását. A hagyományos konfokális mikroszkópban a gerjesztő fényt a minta egyetlen pontjára fókuszálják, majd emissziós fluoreszcens jelet észlelnek. A fókuszon kívüli emissziós sugárzást egy tűlyuk (pinhole) vágja le, amelynek mérete meghatározza, hogy az Airy lemez hány maximuma éri el a detektort. A membrán (csaplyuk) átmérőjének csökkentésével a felbontás növelése érhető el, de a jel-zaj viszony jelentősen csökken a membránon áthaladó emissziós sugárzás intenzitásának csökkenése miatt. Az ilyen szkennelés alternatívája a tömbdetektorok [42] [43] használata , amelyek egyidejűleg regisztrálják az intenzitáseloszlást a minta oldalsíkja mentén az Airy lemez teljes területéről, ahol minden fényérzékeny elem egy fényérzékeny elemként funkcionál. lyuknyílás. Így a 32 csatornás mátrixdetektorral (Airyscan [44] [45] ) végzett detektálási algoritmus segítségével kimutatták, hogy mindhárom dimenzióban több mint 1,7-szeresre lehet túllépni a klasszikus felbontási határt (diffrakciós határt): 140 nm-ig oldalirányban és 400 nm axiálisan 488 nm hullámhosszon [46] [47] [48] [49] [50] [51] [52] .

Alkalmazás

A CLSM-et széles körben használják a biológia szinte minden ágában, a sejtbiológiától és a genetikától a mikrobiológiáig és a fejlődésbiológiáig. Kvantumoptikában és nanokristályos képalkotásban és spektroszkópiában is használják.

Biológia és orvostudomány

Klinikailag a CLSM-et különféle szembetegségek vizsgálatára használják, különösen a szaruhártya endothelsejtek képalkotására, kvalitatív elemzésére és mennyiségi meghatározására [53] . Keratomycosis esetén a szaruhártya stromában található fonalas gombaszálak lokalizálására és azonosítására használják, lehetővé téve a gyors diagnózist és a helyes terápia korai alkalmazását. Ígéretesnek tűnik az endoszkópos eljárások ( endomikroszkópia ) elvégzése is a CLSM módszerrel [54] . A gyógyszeriparban ezt a megközelítést javasolták a vékonyfilmes gyógyszerformák gyártási folyamatának nyomon követésére, a gyógyászati ​​anyagok minőségének és egyenletes eloszlásának ellenőrzésére.

Optika és krisztallográfia

A CLSM-et adat-helyreállítási mechanizmusként használják egyes 3D optikai adattároló rendszerekben vagy kémiai vegyületleképezésben, valamint a félvezetőfizikában és a spintronikában (különösen az NV-központok tulajdonságainak tanulmányozásában ). [55] [56] .

Példa a CLSM módszerrel kapott képekre

Lásd még

Jegyzetek

  1. ↑ Biológiai konfokális mikroszkópia kézikönyve  / JB Pawley. — 3. kiadás. - Berlin : Springer, 2006. - 985 p. — ISBN 0-387-25921-X . - doi : 10.1007/978-0-387-45524-2 .
  2. ↑ Hans Goldmann (1939) – Google Akadémia . scholar.google.ru. Letöltve: 2017. május 11. Az eredetiből archiválva : 2019. június 22.
  3. ↑ 1 2 Wiley-VCH Verlag GmbH & Co. KGaA. Konfokális mikroszkópia | Képalkotás és mikroszkópia - Kutatás, fejlesztés,  gyártás . www.imaging-git.com Letöltve: 2017. május 11. Az eredetiből archiválva : 2017. augusztus 2..
  4. ↑ Barry R. Masters. Konfokális mikroszkópia és többfoton gerjesztési mikroszkópia: Az élő sejtes képalkotás genezise . - SPIE Press, 2006. 01. 01. — 234 p. — ISBN 9780819461186 . Archiválva : 2018. október 22. a Wayback Machine -nál
  5. ↑ Hiroto Naora. Mikrospektrofotometria látható fénytartományban . — 1958-01-01. — könyv s. Archiválva 2019. június 22-én a Wayback Machine -nél
  6. ↑ Konfokális mikroszkópia . Letöltve: 2010. április 9. Az eredetiből archiválva : 2015. szeptember 24..
  7. ↑ US 3013467
  8. ↑ 12 Robert H. Webb . Konfokális optikai mikroszkóp (angol)  // Reports on Progress in Physics. - 1996-01-01. — Vol. 59 , iss. 3 . - 427. o . — ISSN 0034-4885 . - doi : 10.1088/0034-4885/59/3/003 .  
  9. ↑ Guy Cox. Optikai képalkotási technikák a sejtbiológiában, második kiadás . — CRC Press, 2012-06-04. — 319 p. — ISBN 9781439848258 .
  10. ↑ M. David Egger, Mojmir Petran. Új visszavert fényű mikroszkóp festetlen agy- és ganglionsejtek megtekintésére   // Tudomány . - 1967-07-21. — Vol. 157 , iss. 3786 . - P. 305-307 . — ISSN 1095-9203 0036-8075, 1095-9203 . - doi : 10.1126/tudomány.157.3786.305 . Archiválva az eredetiből 2017. október 7-én.
  11. ↑ Mojmír Petráň, Milan Hadravský, M. David Egger, Robert Galambos. Tandem pásztázó, visszavert fényű mikroszkóp* (EN) // JOSA. - 1968-05-01. - T. 58 , sz. 5 . - S. 661-664 . - doi : 10.1364/JOSA.58.000661 .
  12. ↑ A felbontás és kontraszt javításának módja és elrendezése . Letöltve: 2017. május 11. Az eredetiből archiválva : 2016. november 14.
  13. ↑ M. D. Egger, W. Gezari, P. Davidovits, M. Hadravský, M. Petráň. Idegrostok megfigyelése beeső fényben  (angol)  // Experientia. — 1969-11-01. — Vol. 25 , iss. 11 . - P. 1225-1226 . - ISSN 1420-9071 0014-4754, 1420-9071 . - doi : 10.1007/BF01900292 . Archiválva az eredetiből 2018. június 6-án.
  14. ↑ 1 2 P. Davidovits, M. D. Egger. Pásztázó lézermikroszkóp biológiai vizsgálatokhoz (EN) // Alkalmazott optika. — 1971-07-01. - T. 10 , sz. 7 . - S. 1615-1619 . — ISSN 1539-4522 . - doi : 10.1364/AO.10.001615 .
  15. ↑ Barry R. Masters. Konfokális mikroszkópia és többfoton gerjesztési mikroszkópia: Az élő sejtes képalkotás genezise . - SPIE Press, 2006. 01. 01. — 234 p. — ISBN 9780819461186 . Archiválva : 2018. október 22. a Wayback Machine -nál
  16. ↑ CJR Sheppard, A. Choudhury. Képalkotás a pásztázó mikroszkópban  // Optica Acta: International Journal of Optics. — 1977-10-01. - T. 24 , sz. 10 . - S. 1051-1073 . — ISSN 0030-3909 . doi : 10.1080 / 713819421 .
  17. ↑ 1 2 Shinya Inoue. A konfokális szkennelt képalkotás alapjai a fénymikroszkópiában  (angol)  // Handbook Of Biological Konfokális Mikroszkópia / James B. Pawley. – Springer USA, 2006. 01. 01. - P. 1-19 . - ISBN 9780387259215 , 9780387455242 . - doi : 10.1007/978-0-387-45524-2_1 . Az eredetiből archiválva : 2018. június 12.
  18. ↑ C. Cremer, T. Cremer. Megfontolások a nagy felbontású és mélységélességű lézeres pásztázó mikroszkóppal kapcsolatban  // Microscopica Acta. — 1978-09-01. - T. 81 , sz. 1 . - S. 31-44 . - ISSN 0044-376X . Archiválva az eredetiből 2018. október 22-én.
  19. ↑ 1 2 W. B. Amos, J. G. White. Hogyan lépett be a konfokális lézeres pásztázó mikroszkóp a biológiai kutatásba  // A sejt biológiája. - 2003-09-01. - T. 95 , sz. 6 . - S. 335-342 . — ISSN 0248-4900 . Archiválva az eredetiből 2018. október 22-én.
  20. ↑ Konfokális képek digitális képfeldolgozása - ScienceDirect  . www.sciencedirect.com. Letöltve: 2017. május 11. Az eredetiből archiválva : 2019. április 22.
  21. ↑ 1 2 J. G. White, W. B. Amos, M. Fordham. A biológiai struktúrák konfokális és hagyományos képalkotásának értékelése fluoreszcens fénymikroszkóppal  // The Journal of Cell Biology. - 1987-07-01. - T. 105 , sz. 1 . - S. 41-48 . — ISSN 0021-9525 . Az eredetiből archiválva : 2018. január 9.
  22. ↑ John  White . royalsociety.org. Letöltve: 2017. május 11. Az eredetiből archiválva : 2015. november 17.
  23. ↑ Ras onkoprotein kimutatása lepényhal májsejtjeiben (Dab) egy szennyezett területről az Északi-tengeren – ScienceDirect  . www.sciencedirect.com. Letöltve: 2017. május 11. Az eredetiből archiválva : 2019. április 22.
  24. ↑ Kép minden | A Tudós Magazin . A tudós. Letöltve: 2017. május 11. Az eredetiből archiválva : 2016. május 30.
  25. ↑ Berendezés és módszer részecskeanalízishez . Letöltve: 2017. május 11. Az eredetiből archiválva : 2017. március 21.
  26. ↑ Berendezés és módszer részecskeanalízishez . Letöltve: 2017. május 11. Az eredetiből archiválva : 2016. november 23..
  27. ↑ A konfokális mikroszkópok kiszélesítik a sejtbiológiai karrierhorizontokat | A Tudós Magazin . A tudós. Letöltve: 2017. május 11. Az eredetiből archiválva : 2016. május 30.
  28. ↑ Espacenet - Bibliográfiai  adatok . world.espacenet.com. Letöltve: 2017. május 11. Az eredetiből archiválva : 2017. március 29.
  29. ↑ Marvin Minsky, . web.media.mit.edu. Letöltve: 2017. május 11. Az eredetiből archiválva : 2017. december 22.
  30. ↑ Olympus Microscopy Resource Center . olympus.magnet.fsu.edu. Letöltve: 2017. május 11. Az eredetiből archiválva : 2017. május 19.
  31. ↑ 12 James Pawley . Biológiai konfokális mikroszkópia kézikönyve . — Springer Science & Business Media, 2006-06-02. — 1018 p. — ISBN 9780387259215 . Archiválva : 2018. október 22. a Wayback Machine -nál
  32. ↑ Stefan W. A pokol. Far-Field Optical  Nanoscopy (neopr.)  // TUDOMÁNY. - 2007. - T. 316 . - S. 1153-1158 . - doi : 10.1126/tudomány.1137395 .
  33. ↑ Kelly Rae Chi. Mikroszkóp: Egyre növekvő felbontás   // Természet . — 2009-12-03. — Vol. 462 , iss. 7273 . - P. 675-678 . — ISSN 0028-0836 . - doi : 10.1038/462675a . Az eredetiből archiválva : 2010. március 9.
  34. ↑ Mariella Vicinanza, Viktor I. Korolchuk, Avraham Ashkenazi, Claudia Puri, Fiona M. Menzies. A PI(5)P szabályozza az autofagoszóma biogenezist  //  Molecular Cell. — 2015-01-22. — Vol. 57 , iss. 2 . - P. 219-234 . — ISSN 1097-2765 . - doi : 10.1016/j.molcel.2014.12.007 .
  35. ↑ Laurens Liesenborghs, Marijke Peetermans, Jorien Claes, Tiago Rafael Veloso, Christophe Vandenbriele. A von Willebrand-faktorhoz való nyírás-ellenálló kötődés lehetővé teszi a Staphylococcus lugdunensisto tapadását a szívbillentyűkhöz és az endokarditisz kialakulását  //  Journal of Infectious Diseases. — 2016-04-01. — Vol. 213 , iss. 7 . - P. 1148-1156 . — ISSN 0022-1899 . - doi : 10.1093/infdis/jiv773 .
  36. ↑ Hidrogén-peroxid és cellajelzés . — Akadémiai Kiadó, 2013-06-19. — 343 p. — ISBN 9780124055421 . Archiválva : 2018. október 22. a Wayback Machine -nál
  37. ↑ Richard W. Cole, Tushare Jinadasa, Claire M. Brown. Pontszórási függvények mérése és értelmezése a konfokális mikroszkóp felbontásának meghatározásához és a minőségellenőrzés biztosításához  //  Nature Protocols. — 2011-12-01. — Vol. 6 , iss. 12 . - P. 1929-1941 . — ISSN 1754-2189 . - doi : 10.1038/nprot.2011.407 . Archiválva az eredetiből 2017. május 7-én.
  38. ↑ Gerald Burgstaller, Bettina Oehrle, Ina Koch, Michael Lindner, Oliver Eickelberg. A sejtinvázió multiplex profilozása 3D sejtkultúra modellekben  // PLOS One  . - Nyilvános Tudományos Könyvtár , 2013-05-09. — Vol. 8 , iss. 5 . — P.e63121 . — ISSN 1932-6203 . - doi : 10.1371/journal.pone.0063121 . Archiválva az eredetiből 2021. február 11-én.
  39. ↑ Josephine Walter, Silke Keiner, Otto W. Witte, Christoph Redecker. Életkorral összefüggő hatások a hippocampalis prekurzor sejtalpopulációkra és a neurogenezisre  // Az öregedés neurobiológiája. — 2011-10-01. - T. 32 , sz. 10 . - S. 1906-1914 . - doi : 10.1016/j.neurobiolaging.2009.11.011 . Archiválva az eredetiből: 2019. április 22.
  40. ↑ SP Berendezés "Laboratóriumi berendezések" Olympus optikai mikroszkóp "Mikroszkópok az orvostudományhoz és a biológiához" Konfokális mikroszkópok "Olympus FV300 konfokális mikroszkóp (nem elérhető link) . Hozzáférés dátuma: 2009. október 2. Archiválva : 2007. október 16. 
  41. ↑ Gordon S. Kino, Timothy R. Corle. Konfokális pásztázó optikai mikroszkópia és kapcsolódó képalkotó rendszerek . - Akadémiai Kiadó, 1996-09-18. — 353 p. — ISBN 9780080529783 . Archiválva : 2018. október 22. a Wayback Machine -nál
  42. ↑ Patricia Sheehan, Mei Zhu, Anne Beskow, Cyndel Vollmer, Clarissa L. Waites. A szinaptikus hólyagfehérjék aktivitásfüggő lebomlásához a Rab35 és az ESCRT útvonal szükséges  //  Journal of Neuroscience. — 2016-08-17. — Vol. 36 , iss. 33 . - P. 8668-8686 . — ISSN 1529-2401 0270-6474, 1529-2401 . - doi : 10.1523/JNEUROSCI.0725-2016.16 . Archiválva az eredetiből 2017. szeptember 22-én.
  43. ↑ Mo Zhou, Heidi Wiener, Wenjuan Su, Yong Zhou, Caroline Liot. A VPS35 megköti a farnezilált N-Ras-t a citoszolban, hogy szabályozza az N-Ras-forgalmat  //  J Cell Biol. — 2016-08-02. — P.jcb.201604061 . - ISSN 1540-8140 0021-9525, 1540-8140 . - doi : 10.1083/jcb.201604061 . Archiválva az eredetiből 2018. október 22-én.
  44. ↑ Huff József. A ZEISS Airyscan detektora: konfokális képalkotás továbbfejlesztett jel-zaj aránnyal és szuperfelbontással  //  Nature Methods. — 2015-12-01. — Vol. 12 , iss. 12 . — ISSN 1548-7091 . - doi : 10.1038/nmeth.f.388 . Az eredetiből archiválva : 2016. október 13.
  45. ↑ Mayandi Sivaguru, Michael A. Urban, Glenn Fried, Cassandra J. Wesseln, Luke Mander. Az airyscan és a strukturált megvilágítású szuperfelbontású mikroszkóp összehasonlító teljesítménye a pollen felületi textúrájának és 3D alakjának vizsgálatában  // Mikroszkópiai kutatás és technika. - doi : 10.1002/jemt.22732 .
  46. ↑ SGB Furness, DL Hare, A Kourakis, AM Turnley, PJ Wookey. A kalcitonin receptor új ligandja egy potenciális új érzékelőt tár fel, amely modulálja a programozott sejthalált  // Cell Death Discovery. — 2016-10-10. - T. 2 . - S. 16062 . — ISSN 2058-7716 . - doi : 10.1038/cddiscovery.2016.62 . Archiválva az eredetiből 2021. október 14-én.
  47. ↑ Patrick Robison, Matthew A. Caporizzo, Hossein Ahmadzadeh, Alexey I. Bogush, Christina Yingxian Chen. A detirozinált mikrotubulusok becsatolnak és viselik a terhelést az összehúzódó kardiomiocitákban   // Tudomány . — 2016-04-22. — Vol. 352 , iss. 6284 . -P.aaf0659 _ _ — ISSN 1095-9203 0036-8075, 1095-9203 . - doi : 10.1126/science.aaf0659 . Archiválva az eredetiből 2017. június 13-án.
  48. ↑ Enrique Sosa, Rachel Kim, Ernesto J. Rojas, Linzi Hosohama, Jon D. Hennebold. Integrációmentes, vírusmentes rhesus makákó által indukált pluripotens őssejtvonal (riPSC89) embrionális fibroblasztokból  // Stem Cell Research. — 2016-09-01. - T. 17 , sz. 2 . - S. 444-447 . - doi : 10.1016/j.scr.2016.09.015 . Archiválva az eredetiből: 2019. április 22.
  49. ↑ Joanne Bruno, Alexandria Brumfield, Natasha Chaudhary, David Iaea, Timothy E. McGraw. A SEC16A egy RAB10 effektor, amely szükséges az inzulin által stimulált GLUT4-kereskedelemhez a zsírsejtekben  //  J Cell Biol. — 2016-06-21. — P.jcb.201509052 . - ISSN 1540-8140 0021-9525, 1540-8140 . - doi : 10.1083/jcb.201509052 . Archiválva az eredetiből 2018. október 22-én.
  50. ↑ HoJun Jeon, JaeYoon Lee, Hyeongjin Lee, Geun Hyung Kim. Oxigénplazmával kezelt, elektrofonású PCL/dECM rostok nanostrukturált felülete szövetfejlesztéshez  (angol)  // RSC Advances. — 2016-03-31. — Vol. 6 , iss. 39 . — ISSN 2046-2069 . - doi : 10.1039/C6RA03840A . Archiválva az eredetiből 2018. október 22-én.
  51. ↑ Emily Breeze, Natasha Dzimitrowicz, Verena Kriechbaumer, Rhiannon Brooks, Stanley W. Botchway. A C-terminális amfipatikus hélix szükséges a növényi retikulon in vivo tubulus-formáló funkciójához  // Proceedings of the National Academy of Sciences  . - Nemzeti Tudományos Akadémia , 2016-09-27. — Vol. 113 , iss. 39 . - P. 10902-10907 . - ISSN 1091-6490 0027-8424, 1091-6490 . - doi : 10.1073/pnas.1605434113 . Az eredetiből archiválva : 2018. június 1.
  52. ↑ Felipe Mora-Bermúdez, Farhath Badsha, Sabina Kanton, J. Gray Camp, Benjamin Vernot. Különbségek és hasonlóságok az emberi és csimpánz idegi progenitorai között az agykéreg fejlődése során   // eLife . — 2016-09-26. — Vol. 5 . —P.e18683 . _ — ISSN 2050-084X . - doi : 10.7554/eLife.18683 .
  53. ↑ Dipika V. Patel, Charles NJ McGhee. Az élő emberi szaruhártya kortárs in vivo konfokális mikroszkópiája fehér fény és lézeres szkennelési technikák segítségével: egy nagy áttekintés  // Clinical & Experimental Ophthalmology. - 2007-01-01. - T. 35 , sz. 1 . - S. 71-88 . — ISSN 1442-6404 . - doi : 10.1111/j.1442-9071.2007.01423.x . Az eredetiből archiválva: 2016. március 5.
  54. ↑ A. Hoffman, M. Goetz, M. Vieth, P. Galle, M. Neurath. Konfokális lézeres endomikroszkópia: műszaki állapot és aktuális indikációk   // Endoszkópia . — Vol. 38 , iss. 12 . - P. 1275-1283 . - doi : 10.1055/s-2006-944813 . Archiválva : 2019. május 7.
  55. ↑ Fotonika - Tudományos és Műszaki Folyóirat - Fotonika - Kémiai térképezés Vizualizáció: Konfokális Raman Mikroszkópia . www.photonics.su Letöltve: 2017. május 11. Az eredetiből archiválva : 2018. augusztus 26..
  56. ↑ ROBERT BELLINGER, OLYMPUS SCIENTIFIC SOLUTIONS AMERICAS INC. Lézeres konfokális mikroszkópia: A felületi érdesség mérési határainak kihívása . Letöltve: 2017. május 11. Az eredetiből archiválva : 2017. április 20.

Linkek

  Ugrás a Wikidata elemre  Szótárak és enciklopédiák
Bibliográfiai katalógusokban