Reverz transzkripciós PCR

A molekuláris biológiában a reverz transzkripciós polimeráz láncreakciót általában RT - PCR - nek nevezik .  Az RT-PCR egy módszer a ribonukleinsav ( RNS ) egy specifikus fragmensének amplifikálására . [egy] 

Az egyszálú RNS-molekulát fordított transzkripciós reakcióban (RT, eng.  RT, reverz transzkripció ) komplementer DNS -vé ( cDNS ) alakítják, majd a már egyszálú DNS -molekulát hagyományos PCR -rel amplifikálják . Az RT-PCR nem tévesztendő össze a valós idejű PCR-rel ( Q - PCR ), amelyet néha helytelenül RT-PCR-nek is neveznek .  [2]

A módszer leírása

A reverz transzkriptázt egy RNS-szekvencia komplementer DNS-vé alakítására használják :

• 1. Az első lánc reakciója: A komplementer DNS ( cDNS ) egy mRNS-templáton képződik dNTP -kből a reverz transzkriptáz enzim által. A reakciókomponenseket DNS primerrel és reverz transzkriptáz pufferrel keverjük 1 órán át 37 °C-on.
• 2. A második lánc reakciója: Miután a reverz transzkripció befejeződött, és a cDNS képződött az mRNS-templáton, a következő ciklusokat a standard PCR-módszer szerint hajtjuk végre .

30 amplifikációs ciklus után a kívánt szekvencia több millió másolata keletkezik. [2]

Alkalmazás

Az RT-PCR-t egy primerrel komplementer ismert szekvenciarégióval rendelkező mintában RNS-molekulák kimutatására használják. Az RT-PCR-rel végzett exponenciális amplifikáció egy érzékeny technika, amely kis számú RNS-molekulát képes kimutatni.

Ilyen például az RNS-vírusok, például a humán immundeficiencia vírus (HIV), amely egy retrovírus , és ezért a HIV -reverz transzkriptáz enzimet használja a vírus DNS-szintetizálására, amely azután beépül a gazda genomjába . 

Az RT-PCR-t széles körben alkalmazzák genetikai betegségek diagnosztizálására és specifikus RNS-molekulák szemi-kvantitatív meghatározására egy sejtben vagy szövetben, mint a megfelelő gének expressziójának indikátora [3] .

Lásd még

• Polimeráz láncreakció (PCR)
• valós idejű PCR

Jegyzetek

1. ↑ Hunt M. (2006) Valós idejű PCR oktatóanyag - Copyright 2006, The Board of Trustees of the University of South Carolina . Letöltve: 2009. október 20. Az eredetiből archiválva : 2009. október 4.. (határozatlan)
2. ↑ 1 2 Glik B., Pasternak J. Molekuláris biotechnológia. Alapelvek és alkalmazás. - Moszkva: Mir, 2002. - 589 p. — ISBN 5030033289 .
3. ↑ Bustin SA Journal of Molecular Endocrinology, 25 // Az mRNS abszolút mennyiségi meghatározása valós idejű reverz transzkripciós polimeráz láncreakciós vizsgálatokkal  . - 2000. - P. 169-193.

Irodalom

• Glick B., Pasternak J. Molekuláris biotechnológia. Alapelvek és alkalmazás. - Moszkva: Mir, 2002. - 589 p. — ISBN 5030033289 .

Szótárak és enciklopédiák	nagy kínai Britannica (online)